替米沙坦對三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1表達(dá)及功能的影響.pdf

1、背景：許多因素可引起動脈粥樣硬化，如高血糖與胰島素抵抗、高胰島素血癥、血脂異常、高血壓、肥胖、血管內(nèi)皮炎癥、高凝狀態(tài)、血栓傾向、微量蛋白尿等。在這些因素作用下，血管內(nèi)皮功能發(fā)生變化，導(dǎo)致血管內(nèi)膜增生、血管中層平滑肌細(xì)胞變形增殖，從而造成動脈粥樣硬化，引起心、腦血管疾病及周圍血管疾病，進(jìn)一步又會引起腎臟及其他臟器的并發(fā)癥?？梢饎用}粥樣硬化的諸多因素統(tǒng)稱為代謝綜合征，它是心血管疾病與2型糖尿病的重要危險因素，如何早期干預(yù)與治療代謝綜合征已

2、成為目前亟待解決的問題。 血脂異常是代謝綜合征的重要組成部分，甘油三酯≥150mg/d1與高密度脂蛋白(HDL)≤40mg/dl是診斷代謝綜合征的必要條件。而當(dāng)前對脂代謝異常的研究中，膽固醇逆轉(zhuǎn)運系統(tǒng)正逐漸成為臨床干預(yù)治療的焦點。膽固醇逆轉(zhuǎn)運系統(tǒng)是脂代謝過程中重要的生理性保護(hù)機(jī)制之一，其作用是將外周組織(如血管壁)合成儲積的膽固醇在HDL的介導(dǎo)下轉(zhuǎn)運至肝臟，并最終形成膽汁排出，在維持體內(nèi)脂質(zhì)平衡、減少血管壁脂質(zhì)沉積、抑制動脈周樣

3、硬化斑塊形成的過程中具有至關(guān)重要的作用。 膽固醇逆轉(zhuǎn)運過程中的起始步驟是細(xì)胞內(nèi)沉積的膽固醇和磷脂跨膜轉(zhuǎn)運到前βHDL顆粒上。而跨膜蛋白ABCA1正是這一步驟中重要的膜受體之一，其可能的機(jī)制是在胞膜上形成一條通道，促進(jìn)脂質(zhì)以依賴ATP的主動運輸方式從膜內(nèi)側(cè)轉(zhuǎn)運至外側(cè)，使脂質(zhì)結(jié)合到細(xì)胞表面的載脂蛋白(apoA1)上，從而形成前βHDL，這一過程是整個膽固醇逆轉(zhuǎn)運的限速步驟。因此，若能對ABCA1進(jìn)行干預(yù)，即能對膽固醇逆轉(zhuǎn)運過程進(jìn)行調(diào)

4、控，從而在代謝綜合征的治療、抗動脈粥樣硬化斑塊形成等方面都產(chǎn)生重要影響。 ABCA1在轉(zhuǎn)錄水平與轉(zhuǎn)錄后水平都存在復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制，其中在轉(zhuǎn)錄水平的核心調(diào)控因子主要是是核受體PPARγ。PPARγ是調(diào)節(jié)脂代謝與糖代謝的重要核受體，它通過PPAR應(yīng)答元件啟動包括ABCA1在內(nèi)的各類靶基因的轉(zhuǎn)錄。近年的研究發(fā)現(xiàn)，PPARγ的活化能夠提高胰島素敏感性，降低血脂和脂肪酸水平，減輕血管和脂肪組織的炎癥反應(yīng)，抑制動脈粥樣硬化進(jìn)展和減輕中心性肥胖

5、。而這些作用，可能很大程度上與ABCA1的轉(zhuǎn)錄被激活相關(guān)。體外細(xì)胞試驗證實，PPARγ的激動劑比格列酮、羅格列酮均可促進(jìn)ABCA1的表達(dá)，因此，臨床上這些噻唑烷酮類化合物可作為胰島素增敏藥物，在糖尿病的治療中發(fā)揮重要作用。然而，由于具有輕微的血管舒張作用以及對RAS的反饋激活，噻唑烷酮類化合物存在水鈉潴留等副作用，影響了這些藥物在代謝綜合征中的應(yīng)用。 替米沙坦是臨床常用的ARB類藥物，具有明確的抗高血壓療效。最新的研究表明，與其

6、他ARB類藥物不同，由于結(jié)構(gòu)上與比格列酮相似，替米沙坦可作為PPARγ的選擇性激動劑，具有獨立于降壓作用以外的改善代謝的作用，可預(yù)防2型糖尿病和動脈粥樣硬化的發(fā)生。由于其本身具有抗血管緊張素Ⅱ的作用，不引起水鈉潴留等副作用，較噻唑烷酮類化合物更適用于代謝綜合征的治療，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。 然而，替米沙坦與ABCA1兩者之間的相互關(guān)系目前尚沒有文獻(xiàn)報導(dǎo)，作為PPARγ選擇性激動劑的替米沙坦，是否與噻唑烷酮類化合物一樣，能夠通過

7、PPARγ途徑促進(jìn)ABCA1表達(dá)，目前尚無相關(guān)研究。因此，對其進(jìn)行深入研究能夠幫助了解替米沙坦的藥理效應(yīng)以及相關(guān)作用機(jī)制，為其在代謝綜合征和抗動脈粥樣硬化的臨床應(yīng)用提供更多的理論依據(jù)。 目的：本實驗以巨噬細(xì)胞、泡沫細(xì)胞以及肝細(xì)胞作為研究對象，研究替米沙坦作為PPARγ的激動劑，是否可以促進(jìn)PPARγ的靶基因ABCA1的表達(dá)，這種促進(jìn)作用是否通過PPARγ/LXRα-ABCA1軸實現(xiàn)，是否能夠促進(jìn)膽固醇逆轉(zhuǎn)運過程。旨在了解替米沙坦

8、在代謝綜合征的治療與預(yù)防中的相關(guān)作用機(jī)制，為其在代謝綜合征中的應(yīng)用提供進(jìn)一步的實驗室依據(jù)。 方法：實驗選用THP-1單核細(xì)胞系與HEPG2肝癌細(xì)胞系。 巨噬細(xì)胞由THP-1單核細(xì)胞系經(jīng)PMA誘導(dǎo)分化獲得，再經(jīng)ac-LDL處理獲得泡沫細(xì)胞。巨噬細(xì)胞由CD68免疫組化染色鑒定，泡沫細(xì)胞由油紅O染色鑒定。 分別用替米沙坦和纈沙坦、厄貝沙坦、阿托伐他汀對各類細(xì)胞進(jìn)行體外干預(yù)，用PPARγ的抑制劑GW9662或LXRα的抑

9、制劑GGPP進(jìn)行聯(lián)合干預(yù)，獲得各組細(xì)胞模型。 用ELISA法測定各組ABCA1及PPARγ蛋白的表達(dá)。提取各組細(xì)胞RNA，用RT-PCR技術(shù)測定ABCA1mRNA水平。用RIPA裂解液提取各組細(xì)胞總蛋白，用WesternBlot技術(shù)測定ABCA1及PPARγ蛋白的表達(dá)。 酶法結(jié)合高效液相色譜分析(HPLC)技術(shù)測定各組細(xì)胞內(nèi)游離膽固醇水平。 結(jié)論： 1.在常用劑量的血藥濃度下，作用時間與半衰期相符時，替米