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文檔簡介
1、目的:
卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG)和乙肝疫苗是我國新生兒出生24小時內接種的計劃免疫疫苗,用來預防結核病和乙型病毒性肝炎。BCG為結核桿菌的減毒活疫苗,具有很強的非特異性免疫刺激作用,誘導以Th1型細胞免疫為主的免疫應答,能夠誘導多種細胞因子的產生和細胞因子受體的表達。乙肝疫苗的主要成分是乙型肝炎表面抗原(Hepatitis B Surface Antigens,HBsAg),誘導以
2、體液免疫為主的免疫應答,激活B細胞產生抗體來預防乙肝。
近年來,外周獲得性免疫系統(tǒng)對CNS的影響引起廣泛的關注。研究表明,不但腦內有T淋巴細胞,而且腦還有免疫監(jiān)視作用,外周的免疫狀態(tài)能影響到腦的穩(wěn)態(tài)。外周適度輕微激活的T淋巴細胞能通過脈絡膜及其間質進入腦脊液,甚至浸潤入腦,激活CNS常駐小膠質細胞,促進:BDNF及IGF-Ⅰ的分泌,維持成年海馬的神經發(fā)生及認知功能。研究顯示,因母體感染流感病毒會引起子代神經精神疾病如精神分
3、裂癥,自閉癥等的發(fā)生。以色列Schwartz小組研究發(fā)現(xiàn):由豐富環(huán)境(enriched environment)誘導的海馬神經發(fā)生顯著增加與T細胞的浸入和CNS小膠質細胞的激活有關。對聯(lián)合免疫缺陷鼠研究得到的結果顯示:裸鼠海馬的神經發(fā)生受到明顯的損害,但可以通過外周輸入T細胞,部分改善其神經發(fā)生與認知功能。Kipnis等發(fā)現(xiàn),缺少成熟T細胞的免疫缺陷鼠表現(xiàn)為認知功能的損害和行為異常,通過給予以T細胞為基礎的免疫治療后,可恢復其行為和認知
4、功能。同樣,給予精神分裂癥模型鼠T細胞為基礎的免疫治療后,能逆轉其神經發(fā)生及BDNF的下降,改善癥狀。以上結果表明:獲得性免疫系統(tǒng)在維持神經發(fā)生和認知功能的重要性。雖然關于CNS神經發(fā)生與免疫系統(tǒng)的相互作用的分子機制尚需進一步證實,但目前的大量研究表明:外周獲得性免疫狀態(tài)對CNS神經發(fā)生的維持以及更高級的大腦功能發(fā)揮著重要的作用。
我國兒童計劃接種疫苗-卡介苗和乙肝疫苗常規(guī)接種是在新生兒出生24 h內完成。在生命的早期,免
5、疫系統(tǒng)和中樞神經系統(tǒng)均在處于一個特殊的、不完全的快速發(fā)育時期,此時疫苗的常規(guī)接種是否也會因改變機體的外周免疫狀態(tài),從而對新生兒的認知能力及中樞神經發(fā)育產生影響,這是一個十分有趣又亟待解決的問題。
本課題正是在這一理論基礎上,采用免疫檢測、認知功能行為學測試及CNS腦內分子和形態(tài)學驗證相結合的方法,觀察新生期接種卡介苗和乙肝疫苗對小鼠認知功能發(fā)育的影響,旨在為進一步闡述接種卡介苗和乙肝疫苗對CNS神經發(fā)生的影響機制,對我國現(xiàn)
6、階段計劃疫苗的接種具有重要的參考意義。
方法:
分別將兩批新生清潔級C57BL/6小鼠隨機分為四組,每組12只。
第1組,卡介苗組:新生C57BL/6小鼠24小時內背部皮下免疫接種BCG;股四頭肌肌肉注射PBS+鋁佐劑,于生后第2、4周末再各加強1次;
第2組,乙肝疫苗組:新生C57BL/6小鼠出生24小時內,股四頭肌肌肉注射HBV,于生后第2、4周末再各加強免疫1次;24小時內背
7、部皮下注射PBS;
第3組,聯(lián)合免疫組:新生C57BL/6小鼠出生24小時內,皮下免疫接種BCG;股四頭肌肌肉注射HBV,于生后第2、4周末再各加強免疫1次HBV;
第4組,對照組:新生C57BL/6小鼠24小時內背部皮下注射PBS;24小時股四頭肌肌肉注射PBS+鋁佐劑。
兩批小鼠分別于接種4周和8周后:(1)曠場實驗小鼠情緒狀態(tài)及空間探索能力檢測;(2)Morris水迷宮認知功能檢測;(3)
8、流式細胞儀檢測小鼠脾臟T淋巴細胞CD4+、CD8+的含量,計算CD4/CD8,NK細胞的百分比及Th1/Th2比值。(4)免疫組化雙標檢測腦內新生神經元數(shù)量,T細胞、小膠質細胞的分布及數(shù)量,western檢測細胞因子、神經營養(yǎng)因子的含量等。
結論
本實驗采用認知功能檢測和免疫學測定相結合的方法,觀察接種卡介苗和乙肝疫苗對新生小鼠認知功能發(fā)育的影響,以探討生后腦發(fā)育期間,免疫干預對幼年動物認知功能發(fā)育的影響,主
9、要結果如下:
1.接種卡介苗和聯(lián)合接種可使新生小鼠抗原特異性免疫反應明顯向Th1方向極化,表現(xiàn)為CD4+T細胞中產生IFN-γ的細胞明顯增加,產生IL-4的細胞比例降低,Th1/Th2比例升高;脾臟細胞中NK細胞含量下降;疫苗接種后小鼠的脾臟細胞CD4/CD8比值下降。
2.接種乙肝疫苗后,沒有誘導小鼠產生明顯向Th1方向極化的抗原特異性免疫應答,脾臟細胞中NK細胞含量下降,疫苗接種后1個月時小鼠的CD4/C
10、D8比值下降。提示:通過新生期疫苗接種,有效干預了出生后的免疫狀態(tài)。
3.接種卡介苗和乙肝疫苗改變了新生小鼠的認知功能及精神狀態(tài),且變化呈動態(tài)趨勢:疫苗接種后1個月時卡介苗組的認知功能水平及精神狀態(tài)明顯優(yōu)于對照組、乙肝疫苗組及聯(lián)合接種組;但到了疫苗接種后2個月時,卡介苗組與對照組無差別,乙肝疫苗組及聯(lián)合接種組的認知功能水平及精神狀態(tài)仍然較差。提示:新生期接種卡介苗可能促進小鼠認知功能及精神狀態(tài)的發(fā)育,但新生期接種乙肝疫苗對
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