ERCC1、TP-DPD對胃癌化療敏感性的體外研究.pdf

1、研究背景:雖然胃癌的患病率及死亡率在逐年下降，但是在世界范圍內(nèi)，其仍是癌癥致死的主要原因，雖然手術(shù)是治療胃癌的金標(biāo)準(zhǔn)，然而局限性進展期胃癌的術(shù)后復(fù)發(fā)率為40-60％。化療是胃癌治療中不可缺少的部分，實際臨床工作中，臨床醫(yī)生主要根據(jù)NCCN指南選擇化療方案，以鉑類聯(lián)合氟尿嘧啶類藥物的方案為主，而對于進展期胃癌患者，應(yīng)用各種方案進行化療的總反應(yīng)率不超過50％，因此對化療失敗的患者來說，實際上延誤了治療。通過研究相關(guān)耐藥基因的表達水平與化療效

2、果的關(guān)系，可以提前預(yù)測患者的治療效果，從而實現(xiàn)個體化的化療，但是仍然沒有一致的結(jié)論，如何選擇合適的耐藥基因來預(yù)測治療效果成為研究的熱點。
　　 研究目的:鉑類藥物及氟尿嘧啶類藥物的聯(lián)合化療方案廣泛應(yīng)用于胃癌的臨床治療，本研究探討兩類藥物的耐藥基因ERCC1、TP/DPD（TP與DPD的比值）的表達水平分別與細(xì)胞對順鉑、5-DFUR敏感性的關(guān)系，來評價其是否能作為預(yù)測化療敏感性的潛在指標(biāo)應(yīng)用于臨床研究。并初步探索ERCC1、TP/

3、DPD的表達水平與細(xì)胞對聯(lián)合用藥敏感性的關(guān)系，討論是否能使用ERCC1或TP/DPD評價順鉑及5-DFUR聯(lián)用的治療效果。
　　 研究方法:常規(guī)培養(yǎng)6種胃癌細(xì)胞株及正常胃黏膜細(xì)胞GES; Real-time PCR法檢測6種胃癌細(xì)胞株及GES中不添加藥物時ERCC1、TP、DPDmRNA的基本表達水平，GES中各基因的表達水平作為陽性對照用于Real-time PCR結(jié)果分析。Western blot方法檢測6種胃癌細(xì)胞株中不添

4、加藥物時ERCC1蛋白的基本表達水平。不同濃度順鉑、5-DFUR分別單獨作用6h、12h、24h、48h，兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用時培養(yǎng)48小時，用CCK-8法檢測細(xì)胞存活率，并計算半數(shù)抑制濃度(IC50)，通過Spearman等級相關(guān)計算基因（蛋白）表達水平與藥物IC50間的相關(guān)性來反映細(xì)胞對藥物敏感性的關(guān)系。
　　 研究結(jié)果:
　　 1.順鉑作用24h及48h后各細(xì)胞株IC50（順鉑）與不加藥時ERCC1mRNA的基本表達水

5、平呈正相關(guān)(ρ(24h)=0.89，P(24h)=0.019，ρ(48h)=0.94，P(48h)=0.005)，ERCC1 mRNA表達低的細(xì)胞株IC50（順鉑）值也較低，即對順鉑更敏感。而ERCC1蛋白表達水平與IC50(順鉑)不相關(guān)。ERCC1表達水平與IC50(5-DFUR)不相關(guān)(P＞0.05)。
　　 2.5-DFUR作用24h及48h各細(xì)胞株IC50(5-DFUR)與不加藥時TP/DPDmRNA的基本表達水平呈負(fù)相

6、關(guān)(ρ(24h)=-0.829，P(24h)=0.042，ρ(48h)=-0.829，P(48h)=0.042)，TP/DPDmRNA越高的細(xì)胞株IC50(5-DFUR)值越低，即對5-DFUR越敏感。分別比較TP、DPDmRNA表達水平與IC50(5-DFUR)，結(jié)果顯示不相關(guān)。TP、DPD及TP/DPD表達水平與IC50(順鉑)均不相關(guān)(P＞0.05)。
　　 3.順鉑與5-DFUR聯(lián)用48h后，未發(fā)現(xiàn)ERCC1、TP、DP

7、D、 TP/DPDmRNA表達水平與IC50（聯(lián)合用藥）有任何相關(guān)性。
　　 研究結(jié)論:
　　 1.ERCC1mRNA表達水平與細(xì)胞對順鉑的敏感程度呈負(fù)相關(guān)，即ERCC1mRNA表達水平較低的細(xì)胞株對順鉑的敏感性更高， ERCC1可能是預(yù)測胃癌細(xì)胞對順鉑敏感性的指標(biāo)。
　　 2.TP/DPDmRNA值的高低與細(xì)胞對5-DFUR的敏感程度呈正相關(guān)，即該比值較高的細(xì)胞株對5-DFUR的敏感性更高，TP/DPDmRNA