外周血中腫瘤化療敏感基因TYMS和ERCC1對(duì)胃腸道腫瘤患者化療效果的評(píng)估作用.pdf

1、胃腸道腫瘤如胃癌、大腸癌、結(jié)腸癌等是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，我國(guó)是胃腸道腫瘤高發(fā)區(qū)。早期腫瘤手術(shù)切除為主，輔以化療，晚期則以化療為主，可見(jiàn)化療是腫瘤治療中占有重要地位。目前在臨床治療中，5-氟尿嘧啶（5-Fu）與鉑類藥物作為一線化療藥物被廣泛應(yīng)用。不同患者對(duì)相同化療方案的反應(yīng)性不同，預(yù)后也存在差異，說(shuō)明不同患者對(duì)化療的敏感性不同。造成這種化療敏感性差異的重要原因之一是遺傳變異，這種個(gè)體基因的遺傳多態(tài)性可改變化療藥物作用的關(guān)鍵酶的表達(dá)

2、及其生物學(xué)活性，從而調(diào)節(jié)化療藥物代謝與作用靶點(diǎn)的功能，最終影響個(gè)體對(duì)化療的反應(yīng)。隨著腫瘤對(duì)化療藥物耐藥性的出現(xiàn)，尋找能夠衡量腫瘤對(duì)化療藥物敏感度的標(biāo)記物和如何逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥逐漸成為研究的熱點(diǎn)。胸苷酸合成酶基因(thymidylate synthase ，TYMS)和切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1(excision Repair Cross-Complementing 1,ERCC1)是最早引起人們關(guān)注的腫瘤化療敏感基因，其多態(tài)性與腫瘤化療藥物代

3、謝密切關(guān)聯(lián)。國(guó)內(nèi)外大量報(bào)道證實(shí)TYMS基因5'端非編碼區(qū)增強(qiáng)子區(qū)域存在一個(gè)28bp的串聯(lián)重復(fù)序列，根據(jù)此序列的重復(fù)次數(shù)，主要分為重復(fù)兩次的2R型和重復(fù)3次的3R型，最常見(jiàn)的基因型為3R/3R，2R/3R和2R/2R，由于不同的基因型TYMSmRNA的穩(wěn)定性不同，表達(dá)的蛋白產(chǎn)物的量也不一樣，因此造成攜帶不同基因型TYMS的個(gè)體對(duì)5氟尿嘧啶（5-Fu）反應(yīng)性存在差異。ERCC1基因表達(dá)產(chǎn)物可以修復(fù)鉑類化療藥物引起的DNA損傷，但是，如果ER

4、CC1基因第4外顯子的118位密碼子中出現(xiàn)由C→T堿基的突變(C118T)，ERCC1蛋白的表達(dá)量就會(huì)下降，從而增強(qiáng)鉑類化療藥物對(duì)腫瘤的殺傷作用。
　　目前，臨床上對(duì)于化療敏感基因檢測(cè)多采用腫瘤組織標(biāo)本，但患者病程存在個(gè)體差異，可能存在不適合進(jìn)行手術(shù)切除等原因，導(dǎo)致腫瘤組織比較難以獲得。并且，組織在提取核酸過(guò)程中有很多的影響因素，對(duì)目的基因多態(tài)性的檢測(cè)存在一定的局限性。因此，尋求一種方便易取的標(biāo)本類型檢測(cè)腫瘤化療敏感基因多態(tài)性迫在

5、眉睫，這對(duì)腫瘤患者個(gè)體化治療方案的制定將有重要的理論和實(shí)踐意義。
　　近年來(lái)有研究報(bào)道，在大腸癌、直結(jié)腸癌等消化道腫瘤患者外周血中檢測(cè)到TYMS和ERCC1基因多態(tài)性，但是，對(duì)于胃癌患者外周血中是否能夠檢測(cè)到TYMS合ERCC1基因多態(tài)性，以及這些基因多態(tài)性是否與胃癌組織中存在一致性，目前尚不清楚。本研究首先檢測(cè)胃癌患者腫瘤組織與外周血中TYMS和ERCC1基因多態(tài)性，研究此兩種基因在腫瘤組織與外周血中的多態(tài)性是否一致，探究外周血

6、基因多態(tài)性檢測(cè)代替組織檢測(cè)的可行性，在此基礎(chǔ)上，收集經(jīng)5-Fu和鉑類藥物化療的消化道腫瘤如大腸癌、胃癌、結(jié)腸癌等患者外周血，研究外周血TYMS基因與ERCC1基因多態(tài)性在評(píng)估腫瘤患者化療療效中的作用，為腫瘤患者個(gè)體化治療提供一個(gè)簡(jiǎn)便的實(shí)驗(yàn)室評(píng)估檢測(cè)指標(biāo)。
　　方法
　　1.實(shí)驗(yàn)分組:(1)未化療患者標(biāo)本分組:收集43例未經(jīng)化療胃癌患者術(shù)前抗凝外周血及腫瘤組織，將其分為外周血組與腫瘤組織組。(2)化療患者標(biāo)本分組:收集76例采

7、用5-Fu和鉑類藥物進(jìn)行化療的腫瘤患者的外周血，按照實(shí)體腫瘤的療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(RECIST)對(duì)化療患者的近期療效進(jìn)行評(píng)價(jià)，分為化療有效組與無(wú)效組，有效組包括完全緩解(CR)和部分緩解(PR)例數(shù)，無(wú)效組包括病情無(wú)變化(SD)和病情惡化(PD)例數(shù)。
　　2.應(yīng)用PCR法和限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶連式反應(yīng)(PCR-RFLP)法分別檢測(cè)外周血與腫瘤組織中TYMS和ERCC1基因的基因型。
　　3.應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)

8、分析，所得資料均用樣本例數(shù)表示，Spearman法進(jìn)行樣本組間相關(guān)性分析，兩組間的比較用卡方連續(xù)校正法檢驗(yàn)，F(xiàn)isher精確檢驗(yàn)法分析基因型與化療療效的關(guān)系，雙側(cè)檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果
　　1.TYMS和ERCC1基因各基因型與胃癌患者臨床病理因素?zé)o顯著相關(guān)（P＞0.05）。
　　2.未化療患者外周血與腫瘤組織中TYMS基因3R/3R、(2R/2R、2R/3R)基因型檢出率均為72.09％(

9、31/43)、27.91％(12/46)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;ERCC1基因C/C、(T/T、C/T)基因型檢出率均為81.39％(35/43)、18.61％(8/43)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　3.按照RECIST標(biāo)準(zhǔn)對(duì)化療患者的近期療效進(jìn)行評(píng)價(jià)，CR0例，PR24例，SD18例，PD34例。
　　4.化療患者中TYMS基因3R/3R、(2R/2R、2R/3R)基因型檢出率分別為65.79％(

10、50/76)、34.21％(26/76)。攜帶3R/3R基因型的患者共50例，其中CR0例、PR9例、SD14例、PD27例，化療有效組9例，無(wú)效組41例，化療有效率為18％(9/50);攜帶(2R/2R、2R/3R)基因型的患者共26例，其中CR0例、PR15例、SD4例、PD7例，化療有效組15例，無(wú)效組11例，化療有效率為57.69％(15/26)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，有顯著相關(guān)性（F=14.53，P＜0.05)。
　　5.化療患

11、者ERCC1基因C/C、(T/T、C/T)基因型檢出率分別為中63.16％(48/76)、36.85％(28/76)。攜帶C/C基因型的患者共48例，其中CR0例、PR23例、SD10例、PD15例，化療有效組23例，無(wú)效組25例，化療有效率為47.91％(23/48);攜帶(T/T、C/T)基因型的患者共28例，其中CR0例、PR1例、SD8例、PD19例，化療有效組1例，無(wú)效組27例，化療有效率為3.57％(1/28)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

12、，有顯著相關(guān)性（F=19.89，P＜0.05）。
　　結(jié)論
　　1.未化療胃癌患者外周血和腫瘤組織中TYMS與ERCC1基因各基因型檢出率一致，表明外周血標(biāo)本檢測(cè)可替代腫瘤組織檢測(cè)TYMS和ERCC1基因多態(tài)性。
　　2.在5-Fu化療過(guò)程中，攜帶TYMS基因2R/2R或2R/3R基因型的患者療效良好，攜帶3R/3R基因型的患者療效不佳，表明外周血中TYMS基因多態(tài)性可用于評(píng)估5-Fu的療效。
　　3.在鉑類藥物