質(zhì)子泵抑制劑增強胃癌化療敏感性機制研究.pdf

1、背景和目的:胃癌是常見的惡性腫瘤之一?；熓峭砥谖赴┑闹饕委熓侄?，然而耐藥往往成了限制化療藥物療效的一大瓶頸。質(zhì)子泵例如空泡ATP酶(Ⅴ-ATPases)在維持正常細胞及腫瘤細胞內(nèi)外pH方面起了重要作用。質(zhì)子泵抑制劑(PPIs)通過抑制Ⅴ-ATPases的活性，調(diào)節(jié)細胞內(nèi)外pH梯度，增強腫瘤細胞對化療藥物的敏感性。本研究探索常用質(zhì)子泵抑制劑奧美拉唑（omeprazole）能否增強胃癌細胞對化療藥物紫杉醇的敏感性及其可能機制。
　

2、　方法:1、胃癌MGC803細胞系培養(yǎng);2、MTT檢測法檢測奧美拉唑單藥或聯(lián)合化療藥紫杉醇對細胞增殖率的影響，并計算奧美拉唑作用胃癌細胞系的IC50值;3、膜聯(lián)蛋白Ⅴ-異硫氰酸熒光素-碘化丙啶(AnnexinⅤ-FITC-PI)凋亡檢測試劑盒檢測單藥或雙藥聯(lián)合作用后細胞的凋亡情況;4、MDC染色，熒光顯微鏡觀察奧美拉唑作用后的胃癌細胞中自噬泡的聚集情況;5、應(yīng)用WesternBlot法檢測奧美拉唑作用后LC3蛋白的表達情況，檢測細胞自噬

3、變化;6、Western Blot法檢測加入自噬抑制劑3-MA后奧美拉唑誘導(dǎo)的胃癌細胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-3活化片段的變化情況;7、2'，7'—二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)檢測奧美拉唑?qū)ξ赴┘毎麅?nèi)ROS生成的影響;8、應(yīng)用Western Blot法檢測不同濃度奧美拉唑處理細胞后HIF-1α蛋白的表達變化情況。
　　結(jié)果:1、奧美拉唑?qū)ξ赴㎝GC803細胞系的增殖具有顯著抑制作用，培養(yǎng)時間越長，濃度越大，抑制作用越明

4、顯，其抑制作用呈時間及劑量依賴性，聯(lián)合化療藥物紫杉醇，能顯著增強MGC803對紫杉醇的敏感性;2、流式細胞術(shù)檢測結(jié)果表明奧美拉唑預(yù)處理24小時聯(lián)合化療藥紫杉醇能顯著提高胃癌細胞的凋亡率;3、給予胃癌細胞不同濃度的奧美拉唑處理后，胞漿內(nèi)陽性染色的自噬泡數(shù)量較對照組顯著增加;4、免疫印跡實驗表明奧美拉唑能劑量依賴性的誘導(dǎo)胃癌細胞LC3-Ⅱ的表達升高;5、免疫印跡實驗表明抑制細胞自噬后奧美拉唑誘導(dǎo)胃癌細胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-3活化片段