血清ST-PSMD蛋白檢測系統(tǒng)的建立及其在肝癌診斷中的應(yīng)用和意義.pdf

1、第一部分血清ST-PSMD蛋白檢測系統(tǒng)的建立及其在肝癌診斷中的應(yīng)用和意義
　　研究背景:原發(fā)性肝癌(HCC)是我國最常見惡性腫瘤之一，每年新發(fā)病例約占全球50％。由于早期癥狀不典型，出現(xiàn)癥狀時多屬中晚期，臨床確診的肝癌多數(shù)為肝癌的三、四期，腫瘤切除后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率高。最近，肝癌的治療手段不斷發(fā)展，但肝癌患者的預(yù)后并無明顯提高，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移率仍較高。因此早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是腫瘤診治的基本策略，而腫瘤標志物常常是發(fā)現(xiàn)早期腫瘤的線索之一

2、。臨床上，血清甲胎蛋白（AFP）是目前唯一廣泛應(yīng)用的HCC標志物。但是近年研究報道，AFP診斷HCC的陽性率僅為60％-70％，在小肝癌中敏感性更低，容易造成漏診;其次在一些良性肝?。愿窝?、肝硬化）、生殖性畸胎瘤等患者中也可有升高，故AFP在肝癌的診斷上有一定的假陽性和誤診率。目前尚無任何腫瘤標志物可完全準確的診斷肝癌，所以必須結(jié)合多種手段聯(lián)合檢測以提高肝癌的早期診斷率，因此發(fā)現(xiàn)新的高敏感性和特異性的血清腫瘤標志物意義重大。因此，臨

3、床上需要高敏感和特異性的肝癌血清標志物來鑒別肝臟的良惡性病變，同時為高危人群的篩查提供幫助。HCC血清標志物的研究一直是科學(xué)家們的研究的重點，但大多數(shù)研究成果難以滿足實際應(yīng)用的需要。探索高敏感及特異性的血清學(xué)指標尤為重要。
　　ST-PSMD基因，編碼蛋白為人26S蛋白酶體非ATP酶亞基，是蛋白酶體的組分之一。ST-PSMD作為蛋白降解途徑中的重要分子，可以選擇性的結(jié)合到被泛素化標記的蛋白，從而參加和介導(dǎo)蛋白質(zhì)的降解。其表達異常與

4、多種免疫性疾病相關(guān)。課題組的前期研究發(fā)現(xiàn)ST-PSMD在癌旁和正常肝組織中不表達或表達很低，但在臨床肝癌樣本中mRNA水平和蛋白水平的表達均較高;同時ST-PSMD也可促進肝癌細胞的惡性生物學(xué)表型，并且可以作為肝癌預(yù)后評估的標志物;提示ST-PSMD在肝癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用，而ST-PSMD作為肝癌血清學(xué)診斷標志物的價值仍未得到證實。有研究證實ST-PSMD蛋白在多種實體腫瘤中高表達。希望通過本課題的研究，闡明ST-PSMD在

5、肝癌血清學(xué)診斷中的應(yīng)用價值，為臨床肝癌的診斷提供指導(dǎo)。
　　研究目的:通過對肝癌病人血清中ST-PSMD蛋白水平的檢測，深入探討ST-PSMD在肝癌血清學(xué)診斷中的應(yīng)用價值，為肝癌的診斷提供潛在的標志物。
　　實驗方法:通過建立特異針對ST-PSMD的ELISA檢測系統(tǒng)，研究正常人群，肝硬化病人以及肝癌病人血清中ST-PSMD蛋白的表達情況，進一步明確其在不同人群血清樣本中的表達趨勢，與AFP血清水平的表達情況進行比較和分析;

6、同時與臨床資料作聯(lián)合分析;比較分析ST-PSMD和AFP在肝癌血清學(xué)診斷中的敏感性及特異性;進一步評估聯(lián)合血清ST-PSMD和AFP在肝癌血清學(xué)診斷中的應(yīng)用價值。
　　實驗結(jié)果:成功建立人血清學(xué)ST-PSMD蛋白的酶聯(lián)免疫吸附檢測方法，用此方法成功檢測肝癌病人（100例），正常人群(50例)，肝硬化患者（20例）血清中ST-PSMD的表達情況。結(jié)果顯示肝癌病人血清中ST-PSMD的表達明顯高于正常人群，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;同時顯著高

7、于肝硬化患者血清學(xué)水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Youden指數(shù)最大的數(shù)值作為鑒別肝癌、肝硬化患者與正常人群的最佳臨界值(Cutoff)。ST-PSMD診斷肝癌的Cutoff值為0.288ng/ml時的敏感性和特異性分別為71％，84.2％。而選用臨床上血清學(xué)AFP檢測常規(guī)Cutoff值(20ng/ml)，肝癌診斷的敏感性為60％，特異性為84.2％，提示血清ST-PSMD有望作為新的肝癌血清學(xué)診斷標志物;ST-PSMD與AFP聯(lián)合使用時肝癌

8、診斷的敏感性為80％，特異性為84.2％，可進一步提高肝癌血清學(xué)診斷的敏感性。在肝癌組AFP陰性的患者中有67.5％的患者血清ST-PSMD呈陽性，其在AFP陰性的肝癌患者中診斷敏感性為60％，特異性為84.3％;提示ST-PSMD可提高AFP陰性肝癌患者的診斷率，有助于減少漏診率。有肝硬化背景的肝癌患者血清中ST-PSMD水平明顯高于肝硬化組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;結(jié)果提示ST-PSMD有望成為肝臟良惡性疾病鑒別診斷的血清學(xué)標志物。

9、>　　結(jié)論:本課題成功建立了ST-PSMD蛋白的酶聯(lián)免疫吸附檢測系統(tǒng)，檢測了ST-PSMD在不同人群中的血清表達水平。結(jié)果顯示肝癌病人血清中ST-PSMD蛋白的表達明顯高于正常人群和肝硬化患者的血清學(xué)水平。研究結(jié)果表明，ST-PSMD蛋白有望成為新的肝癌早期血清學(xué)診斷標志物，聯(lián)合使用血清ST-PSMD和AFP可進一步提高肝癌血清學(xué)診斷的敏感性，為肝癌臨床診斷提供指導(dǎo);肝硬化肝癌患者血清ST-PSMD水平顯著高于肝硬化患者血清水平，其在兩

10、者的鑒別診斷中存在較好的敏感性和特異性，提示其可能成為鑒別肝臟良惡性疾病的血清學(xué)指標。
　　本課題創(chuàng)新點及潛在應(yīng)用價值:首次建立了人血清中ST-PSMD的ELISA檢測方法。首次將ST-PSMD運用于肝癌病人的血清學(xué)檢測。
　　第二部分肝臟原發(fā)性神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的臨床研究
　　研究背景:原發(fā)性肝臟神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(PHNET)是一種罕見的肝臟腫瘤，大部分患者因沒有明顯的臨床表現(xiàn)而導(dǎo)致診治較晚。因此PHNET的診斷必須依賴于

11、病理表現(xiàn)和免疫表型，同時還要經(jīng)過全面的檢查和長期的隨訪。同原發(fā)性肝癌一樣，手術(shù)切除腫瘤是目前主要的治療手段。雖然有些原發(fā)性肝臟神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤腫塊較大且部位較深，但手術(shù)切除仍可以有效的延長病人生存期，曾有文獻報道過一例巨大型且進展較快的原發(fā)性肝臟神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤在手術(shù)切除術(shù)后無病生存長達4年。對于不適合手術(shù)切除的病人可以考慮肝臟移植手術(shù)，有文獻報道過一例原發(fā)性肝臟神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤患者肝移植術(shù)后無病生存長達7年。目前，學(xué)術(shù)界尚無統(tǒng)一的組織學(xué)分級

12、標準。
　　研究目的:通過對東方肝膽外科醫(yī)院17例原發(fā)性肝臟神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(PHNET)的臨床病理特征以及臨床資料的回顧性分析，提高臨床上對該病的認識和診治水平。
　　實驗方法:根據(jù)消化系統(tǒng)腫瘤WHO分類(2010)神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤分級標準對該院17例病理診斷明確的原發(fā)性肝臟神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(PHNET)進行分級，評價該系統(tǒng)對PHNET的診斷價值，并對臨床資料進行回顧性分析，提高對PHNET的認識。
　　結(jié)果:17例原發(fā)性

13、肝臟神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(PHNET)組織標本進行新標準分型，其中5例因標本因素未能進行分類，12例原發(fā)性肝臟神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(PHNET)中NET G1(5例)，NET G2(7例)，NEC(0例）;17例患者均無明顯類癌綜合征表現(xiàn)，NET(G1，G2)臨床表現(xiàn)無差異。NET G1組術(shù)后無瘤生存率為80％，NET G2組術(shù)后無瘤生存率為57.1％。
　　結(jié)論：原發(fā)性肝臟神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(PHNET)臨床上罕見，患者多無類癌綜合征表現(xiàn)，確診