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文檔簡介
1、目的:觀察脈沖電刺激對H9c2細胞增殖的抑制作用,探討脈沖電刺激對H9c2細胞分化的誘導(dǎo)作用。
方法:
1、H9c2細胞由重慶醫(yī)科大學(xué)老年科教授李剛惠贈。利用新型材料FTO導(dǎo)電玻璃自制3 cm×3 cm大小培養(yǎng)皿,將H9c2細胞接種到培養(yǎng)皿中培養(yǎng),每日在倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)。
2、用不同頻率(0、1、5、10、50、100 Hz)、電壓(0、5、10、20、40、50 V)、時間(0、1、2、4、6、8h
2、/d)的組合脈沖電刺激作用于大鼠H9c2細胞,以5-氮胞苷(5-AzaC)作為干預(yù)因素對照。
3、對電刺激后的H9c2細胞實驗組及對照組利用MTT法檢測其細胞增殖率。
4、采用免疫熒光細胞化學(xué)染色對刺激后H9c2細胞進行心肌肌鈣蛋白(cTnT)及八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(Oct4)的表達檢測。
5、采用RT-PCR法檢測各實驗組H9c2細胞的cTnT、肌球蛋白重鏈α(α-MHC)mRNA表達。
結(jié)果:
3、
1、脈沖電刺激能抑制H9c2細胞增殖(P<0.05),脈沖電刺激的參數(shù)為頻率=1 Hz、時間=4 h/d、電壓=10V時對H9c2細胞增殖的抑制作用最大且不致細胞死亡。
2、用此參數(shù)脈沖電刺激作用于H9c2細胞2周后細胞Oct4表達減少(P<0.05),而cTnT和α-MHC表達仍十分明顯。
結(jié)論:脈沖電刺激能抑制大鼠胚胎心臟組織成肌細胞株H9c2細胞的增殖,同時cTnT和α-MHC表達增強,Oct4表達
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