糜酶對肝星狀細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、目的：運用MTT法、免疫印跡法（Western Blotting）、RT-PCR方法檢測糜酶(Chymase)對肝星狀細(xì)胞(Hepatic stellate cell，HSC)中α-SMA(α-smooth muscleactin)、TGF（Transforming growth factor，TGF）-β1蛋白表達(dá)量及TGF-β1mRNA、Col-ⅠmRNA的表達(dá)。探討糜酶對肝星狀細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)分化的影響及在肝纖維發(fā)生、發(fā)展中的作用。<

2、br>　　方法：1.將試驗用Wisrar雄性大鼠乙醚麻醉后仰臥固定在手術(shù)臺上，行“十字”切口打開腹腔，暴露肝臟、門靜脈及腔靜脈。2.用灌注液對肝臟進(jìn)行處理并得到純化的HSC，將培養(yǎng)的3-4代細(xì)胞用于實驗，并分成空白對照組、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml糜酶組。3.采用MTT比色法檢測HSC的增殖并計數(shù)OD值。4.Western blotting檢測蛋白表達(dá)并定影。5.應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測HSC上TGF-β1mRNA、

3、Col-ⅠmRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.糜酶可明顯促進(jìn)HSC增殖，在觀察的范圍內(nèi)（1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml）呈濃度依賴性，隨著糜酶濃度增高，OD值也升高，糜酶濃度最大時可達(dá)對照組的1.45倍(P＜0.05);
　　2.Western Blotting檢測結(jié)果顯示，在糜酶刺激的肝星狀細(xì)胞中，α-SMA及TGF-β1的表達(dá)明顯增加(P＜0.05);
　　3.RT-PCR法檢測HSC上表達(dá)TGF-β1

4、mRNA及Col-Ⅰ mRNA的表達(dá)明顯增強(qiáng)，在觀察范圍內(nèi)，呈劑量依賴性(P＜0.05)。
　　結(jié)論：1.糜酶顯著促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的增殖，HSC增殖與糜酶濃度呈依賴性。
　　2.糜酶激活肝星狀細(xì)胞α-SMA及TGF-β1蛋白表達(dá)量呈濃度依賴性。
　　3.糜酶激活肝星狀細(xì)胞 TGF-β1mRNA及Col-ⅠmRNA表達(dá)量與糜酶劑量呈依賴性。
　　4.肥大細(xì)胞糜酶明顯激活肝星狀細(xì)胞，并促進(jìn)其增殖及轉(zhuǎn)分化為肌成纖維細(xì)胞。