低氧刺激對(duì)前軟骨干細(xì)胞分化的影響及機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述：
　　第一部分:前軟骨干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定
　　目的：
　　從SD大鼠乳鼠骺板分離純化得到前軟骨干細(xì)胞。
　　方法：
　　1.分離獲得SD大鼠乳鼠股骨和脛腓骨干骺端骺板處軟骨細(xì)胞，并應(yīng)用免疫磁珠分選系統(tǒng)純化得到前軟骨干細(xì)胞，利用免疫熒光進(jìn)行FGFR-3表型鑒定。
　　2.對(duì)前軟骨干細(xì)胞進(jìn)行阿利新藍(lán)染色。
　　結(jié)果：
　　1.分離純化的前軟骨干細(xì)胞形態(tài)均一

2、，呈梭形或三角形。免疫熒光FGFR-3表型陽(yáng)性。
　　2.前軟骨干細(xì)胞所形成的軟骨團(tuán)塊阿利新藍(lán)染色陽(yáng)性。
　　結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)利用免疫磁珠分選系統(tǒng)成功獲得前軟骨干細(xì)胞。
　　第二部分:物理性低氧及化學(xué)性低氧對(duì)前軟骨干細(xì)胞分化的影響
　　目的：
　　研究低氧刺激對(duì)前軟骨干細(xì)胞分化的影響。
　　方法：
　　1.1％氧濃度刺激前軟骨干細(xì)胞不同的時(shí)間以后檢測(cè) HIF-1α、SOX9、COL-II

3、、AGG mRNA表達(dá)量的變化及 HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG、ALP蛋白水平表達(dá)量的變化。
　　2.1%氧濃度刺激前軟骨干細(xì)胞后予以常氧條件下培養(yǎng)檢測(cè) HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG、ALP蛋白水平表達(dá)量變化。
　　3.不同濃度氯化鈷刺激前軟骨干細(xì)胞后檢測(cè)HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG mRNA表達(dá)量的變化及HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG、ALP蛋白水平表達(dá)量的變化

4、。
　　結(jié)果：
　　1.1%氧濃度刺激前軟骨干細(xì)胞一定時(shí)間后 HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG mRNA表達(dá)量均升高。HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG蛋白水平表達(dá)量升高，而 ALP蛋白表達(dá)量變化不明顯。
　　2.常氧環(huán)境下調(diào)由低氧刺激引起的HIF-1α、SOX9、COL-II和AGG蛋白水平表達(dá)量的升高。而ALP蛋白水平表達(dá)量并沒(méi)有顯著改變。
　　3.一定濃度的氯化鈷刺激前軟骨干細(xì)胞后 H

5、IF-1α、SOX9、COL-II、AGG mRNA表達(dá)量升高，并且HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG蛋白水平表達(dá)量也有所升高，而ALP蛋白表達(dá)量變化不明顯。
　　結(jié)論：
　　低氧能促進(jìn)前軟骨干細(xì)胞成軟骨分化。
　　第三部分:物理性低氧及化學(xué)性低氧對(duì)前軟骨干細(xì)胞YAP表達(dá)量的影響
　　目的：
　　研究低氧刺激前軟骨干細(xì)胞后YAP表達(dá)量的變化。
　　方法：
　　1.1%氧濃度刺激前軟骨干

6、細(xì)胞不同時(shí)間后檢測(cè)YAP mRNA及蛋白水平表達(dá)量的變化。
　　2.1%氧濃度刺激前軟骨干細(xì)胞后予以常氧條件下培養(yǎng)，檢測(cè)YAP蛋白水平表達(dá)量的變化。
　　3.不同濃度的氯化鈷刺激前軟骨干細(xì)胞后檢測(cè)YAP mRNA及蛋白水平表達(dá)量變化。
　　結(jié)果：
　　1.1%氧濃度刺激前軟骨干細(xì)胞一定時(shí)間后YAP mRNA及蛋白水平表達(dá)量升高。
　　2.常氧環(huán)境下調(diào)由低氧刺激引起的前軟骨干細(xì)胞YAP蛋白表達(dá)量的升高。