C4orf7在卵巢癌中生物學(xué)效應(yīng)的體內(nèi)驗(yàn)證.pdf

1、【目的】驗(yàn)證C4orf7在荷人卵巢癌裸鼠體內(nèi)模型中的生物學(xué)效應(yīng)。
　　【方法】基因C4orf7最初是在人扁桃體隱窩中分離的濾泡樹突狀細(xì)胞,又名為FDC-SP(濾泡樹突狀細(xì)胞分泌蛋白),我們前期的實(shí)驗(yàn)從組織、細(xì)胞、分子水平發(fā)現(xiàn)C4orf7基因在卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移中有促進(jìn)作用,現(xiàn)篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染正義反義C4orf7的卵巢癌細(xì)胞并擴(kuò)增培養(yǎng),建立荷人卵巢癌裸鼠體內(nèi)模型。實(shí)驗(yàn)方法分別用熒光實(shí)時(shí)定量Real Time RT-PCR檢測(cè)和Wester

2、n blot法檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染正義反義C4orf7的卵巢癌細(xì)胞株C4orf7表達(dá)水平及E-CAD蛋白的表達(dá),荷人卵巢癌裸鼠皮下模型隨機(jī)分為8組:正義穩(wěn)轉(zhuǎn)C4orf7基因的A2780C4+細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組、空載體A2780N1陰性對(duì)照組、未做處理的A2780細(xì)胞空白組、A2780鹽水組和反義穩(wěn)轉(zhuǎn)C4orf7基因的SKOV3C4-細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組、空載體SKOV3NC為陰性對(duì)照組、未作處理的SKOV3空白組、SKOV3鹽水組,對(duì)比觀察基因C4orf7干預(yù)前

3、后卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用。
　　【結(jié)果】C4orf7 mRNA在卵巢癌細(xì)胞株A2780的空白組、陰性對(duì)照、實(shí)驗(yàn)組中的相對(duì)表達(dá)量分別為(0.698±0.044)、(1±0.242)、(10.770±0.146),實(shí)驗(yàn)組表達(dá)均明顯高于空白組和陰性對(duì)照組(均P<0.05);C4orf7 mRNA在卵巢癌細(xì)胞株SKOV3的空白組、陰性對(duì)照、實(shí)驗(yàn)組中的相對(duì)表達(dá)量分別為(3.311±0.231)、(3.102±0.104)、(0.023±0.0

4、64),實(shí)驗(yàn)組表達(dá)均明顯低于空白組和陰性對(duì)照組(均P<0.05);Western blot檢測(cè)C4orf7高表達(dá)同時(shí)并伴隨著E-cad的下降,低表達(dá)同時(shí)則表現(xiàn)E-cad上升;所有裸鼠可見皮下瘤塊不同程度的生長(zhǎng),瘤塊組織的HE染色結(jié)果證實(shí)符合腫瘤組織結(jié)構(gòu),其中正義轉(zhuǎn)染C4orf7的4＃A2780C4+的實(shí)驗(yàn)組裸鼠皮下腫瘤體積均較其他組別大(均P<0.05),且唯有正義轉(zhuǎn)染C4orf7的4＃A2780C4+的實(shí)驗(yàn)組裸鼠肺部組織HE染色結(jié)果顯