有益乳酸芽孢桿菌的選育及其培養(yǎng)條件的優(yōu)化.pdf

1、從自然環(huán)境、人畜食品、健康動物胃腸道內(nèi)容物等樣品中選育有益乳酸芽孢桿菌，并對其進行培養(yǎng)條件的優(yōu)化，為乳酸芽孢桿菌類微生態(tài)制劑的研發(fā)奠定基礎。 用添加溴甲酚紫指示劑的GYP平板從67樣品中分離出41株產(chǎn)酸芽孢桿菌，通過高效液相色譜檢測、抑菌試驗和芽孢形成數(shù)試驗，從中篩選出SC株、SL1株、TR株等三株性能優(yōu)良的產(chǎn)乳酸芽孢桿菌。通過Biolog微生物自動鑒定系統(tǒng)、16SrRNA堿基序列分析，對三株菌進行種屬關系的分析鑒定。鑒定結(jié)果是

2、：SC株株為乳酸芽孢桿菌SC(暫命名)，TR株為乳酸芽孢桿菌TR(暫命名)，SL1株為蠟狀芽孢桿菌。 選用乳酸芽孢桿菌SC作為出發(fā)菌株，以紫外線、亞硝基胍作誘變物，以不同的濃度和作用時間對SC株進行復合誘變；誘變培養(yǎng)后，挑選出200株誘變株，比較它們的產(chǎn)酸、抑菌活性和芽孢形成率等三方面的性能，最終篩選得到一株芽孢形成率符合要求，產(chǎn)酸能力和抑菌活性均有提高的正向突變株，即乳酸芽孢桿菌SC27株。用SC27株培養(yǎng)物對5組昆明系SPF

3、小鼠進行急性毒性試驗，將培養(yǎng)物按10、5、2.5、1.25、0.625g/kg五種劑量分別給小鼠灌胃染毒，并記錄每天情況。整個試驗過程中無小鼠死亡，小鼠亦無病理解剖學變化。 穩(wěn)定性試驗的結(jié)果表明，SC27株具有較好的熱穩(wěn)定性，在濕熱處理中，當溫度達到100℃、作用時間在20min以上時，活菌數(shù)才下降一個數(shù)量級。在干熱處理中，在80℃、40min和100℃、60min的時候顯示該活菌數(shù)為零，而其它不同溫度和不同處理時間均不能使該活

4、菌數(shù)下降一個數(shù)量級；同時，SC27株對pH值2.2～7.0具有很好的耐受性，說明具有較強的耐酸性；但該菌株對多數(shù)抗生素較為敏感。 通過乳酸芽孢桿菌SC27的體外抑菌試驗，表明該菌的培養(yǎng)物對金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏桿菌等五種革蘭氏陽性、陰性指示菌有明顯的抑制作用；另外，試驗結(jié)果顯示SC27株培養(yǎng)物的抑菌物質(zhì)具有較好的熱穩(wěn)定性，受木瓜蛋白酶、蛋白酶K、胰蛋白酶的影響較小。 在培養(yǎng)條件的探索上，以pH值、芽孢產(chǎn)生總數(shù)、芽孢形

5、成率作參考指標并考慮培養(yǎng)基成本的問題，比較篩選出適宜該菌生長的碳源、氮源，在此基礎上進一步考慮添加對乳酸和芽孢形成有利的金屬離子，利用正交試驗設計，對SC27株進行培養(yǎng)條件的優(yōu)化。最終得出培養(yǎng)基的優(yōu)化組合是：黃豆汁0.5％、甘蔗汁13％、K2HPO40.05‰、MgSO40.05‰、MnSO40.02‰；其培養(yǎng)條件的優(yōu)化組合是：發(fā)酵溫度為37℃；接種量為10％；裝液量為40mL/250mL；先搖床120r/min培養(yǎng)24h，再轉(zhuǎn)入靜置培