雷帕霉素高產(chǎn)菌株的選育及培養(yǎng)條件的優(yōu)化.pdf

1、雷帕霉素(Rapamycin)是從吸水鏈霉菌Streptomyceshygroscopicus中分離出來(lái)的三烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，它是一種新型高效免疫抑制劑，同時(shí)又是一種有效的抗真菌劑并具有抗腫瘤的作用。本論文對(duì)雷帕霉素產(chǎn)生菌的選育及發(fā)酵生產(chǎn)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，并取得了一定的效果。 建立了雷帕霉素的液相色譜檢測(cè)方法與生物活性檢測(cè)方法，并研究了兩者之間的聯(lián)系，證實(shí)了兩者具有一定的正相關(guān)性，基于這一前提，開(kāi)發(fā)了一套高效的新型瓊脂塊高通量

2、篩選技術(shù)，為大規(guī)模篩選工作打下了基礎(chǔ)。 從原始培養(yǎng)基出發(fā)，我們分別對(duì)斜面培養(yǎng)基，種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行考察，研究了菌種的生長(zhǎng)特性，并對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)基優(yōu)化，雷帕霉素的產(chǎn)量比初始培養(yǎng)基中雷帕霉素的產(chǎn)量提高了97％。 根據(jù)雷帕霉素在不同時(shí)期的生理狀態(tài)及合成途徑，設(shè)計(jì)出單一誘變劑連續(xù)誘變、物理和化學(xué)誘變劑交替誘變、物理和化學(xué)誘變劑連續(xù)誘變等誘變路徑，對(duì)雷帕霉素產(chǎn)生菌進(jìn)行多輪次的循環(huán)誘變，篩選到最高產(chǎn)量為279m

3、g·L-1的誘變菌株一株，比出發(fā)菌株的產(chǎn)量提高了156％。 對(duì)雷帕霉素產(chǎn)生菌的原生質(zhì)體制備和再生條件進(jìn)行了優(yōu)化，研究了雷帕霉素產(chǎn)生菌的熱滅活和紫外滅活效應(yīng)，對(duì)雷帕霉素產(chǎn)生菌的單親滅活和雙親融合進(jìn)行了考察，根據(jù)雷帕霉素和紅霉素在合成途徑上的相似性，考察了兩種菌株原生質(zhì)體的種間融合，對(duì)融合子生產(chǎn)能力進(jìn)行測(cè)定，最高產(chǎn)量達(dá)到345mg·L-1。 基于全基因組重排理論，經(jīng)過(guò)三輪融合和再生，篩選到1株搖瓶發(fā)酵產(chǎn)量最高達(dá)到445mg·