組合抗藥性選育秦嶺霉素高產(chǎn)菌株及發(fā)酵優(yōu)化研究.pdf

1、秦嶺鏈霉菌(Streptomyces qinlingensis sp．nov)是西北農(nóng)林科技大學(xué)農(nóng)藥研究所從秦嶺土壤中分離的一株放線菌，前期研究表明發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)多種植物病原真菌和細(xì)菌具有較強(qiáng)的抑制作用，但其發(fā)酵產(chǎn)物中生物活性物質(zhì)含量卻很低，限制了對(duì)它的進(jìn)一步研究和開發(fā)利用。為了開發(fā)秦嶺鏈霉菌的潛在價(jià)值，本文從三方面對(duì)其進(jìn)行了研究：一是研究應(yīng)用組合抗生素抗性突變法選育秦嶺鏈霉菌高產(chǎn)菌株；二是對(duì)高產(chǎn)菌株的發(fā)酵條件優(yōu)化進(jìn)行了研究；三是對(duì)高產(chǎn)菌株

2、的前體添加方案進(jìn)行了初步研究。主要研究結(jié)果如下： (1)應(yīng)用組合抗生素抗性突變法選育秦嶺鏈霉菌高產(chǎn)菌株的研究結(jié)果表明，通過鏈霉素和慶大霉素組合抗性選育高產(chǎn)菌株是一種有效的育種手段。通過組合抗性選育獲得了抑菌活性顯著高于秦嶺鏈霉菌的3株抗性突變株GS-4-04、GS-4-05和GS-4-06，其發(fā)酵液對(duì)5種細(xì)菌和4種病原真菌的抗菌活性比出發(fā)菌株顯著提高，其中GS-4-04對(duì)供試細(xì)菌的抗菌活性提高20.1～28.9％，對(duì)供試病原真菌

3、的毒力是出發(fā)菌株的0.4～2.4倍；GS-4-05對(duì)供試細(xì)菌的抗菌活性提高18.4～28.9％，對(duì)供試病原真菌的毒力是出發(fā)菌株的1.7～4.6倍；GS-4-06對(duì)供試細(xì)菌的抗菌活性提高25.0～33.3％，對(duì)供試病原真菌的毒力是出發(fā)菌株的1.5～5.4倍。 (2)對(duì)高產(chǎn)菌株發(fā)酵優(yōu)化的研究結(jié)果表明，GS-4-04菌株的最佳液體培養(yǎng)基組成為：5g/L葡萄糖、10 g/L小米、3 g/L蛋白胨、2g/L Ca2+，最佳發(fā)酵條件為：初始

4、pH值7.0，250mL三角瓶裝發(fā)酵液100mL，接種量10％，發(fā)酵96h-120h；GS-4-05菌株的最佳液體培養(yǎng)基組成為：15g/L葡萄糖、5g/L小米、4.5g/L蛋白胨、2g/L Ca2+，最佳發(fā)酵條件為：初始pH值7.0，250 mL三角瓶裝發(fā)酵液100mL，接種量10％，發(fā)酵96h-120h；GS-4-06菌株的最佳液體培養(yǎng)基組成為：5g/L葡萄糖、15g/L小米、4.5g/L蛋白胨、2.5g/L Ca2+，最佳發(fā)酵條件為

5、：初始pH值7.0，250 mL三角瓶裝發(fā)酵液100mL，接種量10％，發(fā)酵96h-120h。 (3)對(duì)高產(chǎn)菌株前體添加的研究結(jié)果表明，在秦嶺鏈霉菌抗性突變菌株GS-4-04發(fā)酵24b～60h時(shí)添加0.05％的L-精氨酸，在GS-4-05發(fā)酵36h～48h時(shí)添加0.1％的L-精氨酸，在GS-4-06發(fā)酵48h～60h添加0.1％的L-精氨酸，至發(fā)酵培養(yǎng)96h后該三株抗性突變菌株發(fā)酵液的抑菌活性較不添加前體物質(zhì)的發(fā)酵液抑菌活性均有