高脂酶活力鹽霉素高產(chǎn)菌株選育及發(fā)酵工藝優(yōu)化.pdf

1、鹽霉素是由白色鏈霉菌(Streptomyces albus)產(chǎn)生的聚醚類動(dòng)物專用抗生素,作為抗球蟲劑在世界范圍內(nèi)得到普及,特別是其高效廣譜性、低耐藥性和低殘留,對(duì)肉雞、豬、牛等增重效果顯著等特點(diǎn)得到養(yǎng)禽業(yè)的認(rèn)可。 國內(nèi)于90年代初開始生產(chǎn)鹽霉素。由于發(fā)酵單位低,造成成本高,質(zhì)量差,產(chǎn)品缺乏競爭力。而通過菌種改良和發(fā)酵工藝優(yōu)化,提高發(fā)酵單位、降低成本的有效手段。 本文建立了分光光度法測(cè)定發(fā)酵培養(yǎng)基中脂肪酸、豆油和發(fā)酵液中脂肪酶活力的方法。

2、脂肪酸與Cu2+在一定條件下形成淡綠色化合物,在715nm處有最大吸收。通過測(cè)定發(fā)酵液中脂肪酸和發(fā)酵液中豆油水解生成的脂肪酸及其變化,可計(jì)算出豆油含量和酯酶活力。 建立了高效的高產(chǎn)菌株篩選方法。鹽霉素的合成途徑為聚多酮途徑,起始單位是三碳單位丙二酰CoA。以植物油或動(dòng)物油作為培養(yǎng)基碳源能提供更多的三碳和二碳單位,有利于鹽霉素的合成。通過比較具有不同生產(chǎn)能力的鹽霉素產(chǎn)生菌的脂肪酶活力,發(fā)現(xiàn)酯酶活力與鹽霉素發(fā)酵單位呈正相關(guān)的關(guān)系,高產(chǎn)菌株具

3、有較高的脂肪酶活力。以脂肪酶活力為初篩指標(biāo)篩選鹽霉素高產(chǎn)菌株,可大大提高獲得鹽霉素高產(chǎn)菌株的幾率。出發(fā)菌株純化后,經(jīng)紫外線和氯化鋰復(fù)合誘變處理,在含豆油的固體培養(yǎng)基上以豆油水解圈直徑與菌落直徑的比為指標(biāo)進(jìn)行初篩,選出水解圈直徑與菌落直徑的比大的菌珠。再通過搖瓶復(fù)篩,從中篩選出鹽霉素高產(chǎn)菌株。所篩選出的菌株發(fā)酵水平比出發(fā)菌株提高了13.5%。該篩選方法比傳統(tǒng)的方法,減少初篩工作量,提高了篩選效率。 對(duì)篩選出的鹽霉素高產(chǎn)突變株,進(jìn)行生理特性