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L-乳酸生產(chǎn)菌株的誘變選育及培養(yǎng)基的優(yōu)化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文首先對干酪乳桿菌進行紫外誘變和NTG誘變,得到蔗糖耐受性高的突變菌株,以此作為基因組改組的出發(fā)菌住,制得原生質(zhì)體,將原生質(zhì)體分別于紫外線和熱滅活后融合,并在再生平板中培育活性融合子,將融合子通過蔗糖YE平板篩選并重復篩選或得了能夠高效利用蔗糖發(fā)酵的F2代菌株。F2代菌株在15%蔗糖含量發(fā)酵48 h后,乳酸產(chǎn)量達到125.2 g/L,較原始菌株77.6 g/L提高了61.0%,說明通過基因組改組技術在短期內(nèi)獲得了產(chǎn)酸速率明顯提高并且耐

2、酸性強、耐高糖的基因組改組菌株F2代菌株。
   同時我們通過氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用與EDTA定鈣法對乳酸含量測定進行比較發(fā)現(xiàn),利用EDTA定鈣法測得的乳酸濃度比GC-MS法得到的數(shù)據(jù)要偏大。不同的發(fā)酵條件,偏大的程度不一樣,相差一般在3.3%~5.9%之間。但上述數(shù)據(jù)也表明,參照相應的GC-MS檢測結(jié)果,將EDTA定鈣法得到的結(jié)果經(jīng)適當?shù)男U龘Q算,可方便地用于生產(chǎn)現(xiàn)場的實際檢測。在對乳酸菌在誘變前后蔗糖酶活性分析實驗中,當加入15.

3、0%的蔗糖進行48 h發(fā)酵,原始菌與改組菌都能很好的生長,并且在改組菌中蔗糖酶活性比原始型有顯著提高,從0.54 U/mg cells提高到1.93 U/mg cells,提高了近4倍。蔗糖酶電泳及活性染色實驗進一步證明了蔗糖酶既存在改組菌也存在于原始菌中。
   最后,在培養(yǎng)基優(yōu)化實驗中,通過單因子試驗和生物統(tǒng)計優(yōu)化方法,確定了Lc-F2菌株發(fā)酵的最適接種量為10%(v/v),中和劑CaCO3最適加入量為10%。通過Plack

4、ett-Burman試驗設計確定了糖蜜、玉米漿粉、Tween 80為Lc-F2發(fā)酵生產(chǎn)乳酸主要影響因素,然后采用中心組合實驗設計和響應面法分析方法對這些主要因素進行了量化優(yōu)化。最終獲得優(yōu)化培養(yǎng)基的組成為:糖蜜為156g/L,玉米漿粉為36.8g/L,Tween 80為1.84 mL/L。在優(yōu)化條件下,Lc-F2菌株乳酸產(chǎn)量為103.3g/L,,與優(yōu)化前的Lc-F2菌株36h的YE培養(yǎng)基發(fā)酵結(jié)果相比,產(chǎn)率提高了0.97g/L/h,轉(zhuǎn)化率提

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