雪蓮細胞培養(yǎng)及二氫黃酮醇-4-還原酶(DFR)基因的分離克隆研究.pdf

1、雪蓮（Saussurea involucrata Kar et Kir）是一類名貴中草藥，主要藥用活性成分為黃酮類化合物。該文通過研究不同植物激素對雪蓮愈傷組織誘導和分化的影響，探索不同植物激素和培養(yǎng)時間對雪蓮愈傷組織生長量和總黃酮含量的影響，并分離了雪蓮DFR基因片段，利用生物軟件對DFR基因和蛋白質的結構和功能進行分析、預測。為基于愈傷組織所進行的遺傳轉化提供參考數(shù)據(jù)。主要研究結果如下：
　　 1.雪蓮種子萌發(fā)
　　

2、 溫度、培養(yǎng)基成分和滲透勢顯著影響雪蓮種子的萌發(fā)，其中溫度對雪蓮種子萌發(fā)影響極顯著，20/10℃變溫條件下種子萌發(fā)率最高；滲透勢和培養(yǎng)基成分對雪蓮種子萌發(fā)影響顯著，種子萌發(fā)的最適培養(yǎng)基為1/2MS0。聚乙二醇（PEG）高于-0.9MPa時，種子不能萌發(fā)。
　　 2.植物激素對雪蓮愈傷組織誘導和分化的影響
　　 植物激素對雪蓮愈傷組織的誘導和分化影響顯著。單因素誘導中，NAA的誘導效果顯著優(yōu)于其他激素，誘導效果：根>葉

3、柄>葉片；NAA與6-BA激素組合誘導中，葉片與葉柄誘導率之間存在極顯著性差異，而葉片與根，葉柄與根的誘導率之間存在顯著性差異，誘導效果：葉片>葉柄>根。以葉片為外植體，最佳誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA1.00mg/L+NAA2.00mg/L；最佳出芽培養(yǎng)基為MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.20 mg/L；最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS0+NAA0.30mg/L+KT0.03mg/L。
　　 3.雪蓮愈傷組織黃酮類化合物的

4、測定
　　 研究繼代培養(yǎng)基和培養(yǎng)時間對雪蓮愈傷組織生長量、總黃酮含量和產量的影響，結果表明：（1）繼代培養(yǎng)基以MS+NAA 2.00mg/L+6-BA1.00mg/L中愈傷組織生長量和總黃酮產量最高；以MS+NAA 4.00mg/L+6-BA2.00mg/L中的愈傷組織總黃酮含量最高；（2）愈傷組織生長量隨繼代培養(yǎng)時間的延長而增加，其總黃酮含量不穩(wěn)定，在繼代培養(yǎng)第30d達到最高。
　　 4.雪蓮DFR基因片段的分離克隆