唐古特白刺二氫黃酮醇4-還原酶基因(DFR)的克隆與功能分析.pdf

1、植物在生長發(fā)育的過程中會(huì)遭受各種各樣的非生物脅迫，如UV-B、干旱、鹽脅迫等。植物能通過積累多種小分子次生代謝產(chǎn)物，幫助其抵抗各種脅迫，花青素就是其中重要的一類。花青素具有良好的活性氧自由基（ROS）清除能力，能減輕非生物脅迫帶來的氧化損傷。二氫黃酮醇4-還原酶(dihydroflavonol4-reductase，DFR)是花青素合成途徑下游的關(guān)鍵酶，決定植物積累花青素的種類，這對(duì)植物通過積累花青素來抵抗逆境脅迫具有十分重要的意義。唐

2、古特白刺生長于自然環(huán)境惡劣的干旱和半干旱地區(qū)，對(duì)嚴(yán)峻條件下的各種非生物脅迫具有極強(qiáng)的耐受力和抵抗力。
　　本研究利用RT-PCR和RACE技術(shù)，克隆唐古特白刺二氫黃酮醇4-還原酶（NtDFR）基因cDNA全長序列，該基因全長1392bp，其開放閱讀框（ORF，Open Reading Frame）長度為1020bp，編碼339個(gè)氨基酸。將擴(kuò)增得到的ORF片段與pPZP221載體連接重組，得到pPZP221-NtDFR植物表達(dá)載體。

3、農(nóng)桿菌浸染擬南芥并篩選至T3代純合子，得到了6個(gè)轉(zhuǎn)基因擬南芥株系，并進(jìn)行PCR驗(yàn)證，結(jié)果均有條帶，無假陽性。選取L2、L3、L5三個(gè)株系的轉(zhuǎn)基因擬南芥用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　對(duì)野生型和轉(zhuǎn)基因型擬南芥進(jìn)行0h、2h、4h和6h的UV-B脅迫，0d、10d和15d的干旱脅迫，以及0mM、75mM和150mM的NaCl脅迫。野生型和轉(zhuǎn)基因型擬南芥的花青素含量，結(jié)果表明3種脅迫條件下轉(zhuǎn)基因型擬南芥中的花青素含量高于野生型，證實(shí)了NtDFR的過