全內(nèi)反射熒光顯微鏡檢測人胃癌細胞膜上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體分子.pdf

1、本論文主要分三部分：Ⅰ.單個生物分子的檢測。Ⅱ.全內(nèi)反射熒光顯微鏡檢測人胃癌細胞膜上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體。Ⅲ.全內(nèi)反射熒光顯微鏡檢測人胃癌細胞單個內(nèi)涵體的形成。 Ⅰ.在論文的第一部分首先對單分子檢測的研究進行了簡單的介紹。其次對激光誘導熒光檢測單分子進行了詳細的綜述。這一部分涉及到單分子檢測和操縱技術(shù)、單分子檢測的應(yīng)用、單分子檢測的技術(shù)關(guān)鍵及單分子證據(jù)、熒光探針及展望。重點對全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)及在生物單分子檢測的應(yīng)用進行了介紹，包括顯

2、微鏡成像原理、離體和活細胞中的生物單分子檢測。共引用文獻99篇。 Ⅱ.本論文的第二部分對全內(nèi)反射熒光顯微鏡檢測人胃癌細胞膜上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體進行了詳細的研究。我們對背景噪聲的降低，細胞貼壁時間，細胞密度，轉(zhuǎn)鐵蛋白的孵育溫度，濃度，時間，加入順序等多種因素進行了研究。確定人胃癌細胞膜上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的檢測條件為：細胞密度：5×105個/mL；細胞貼壁時間：10h；轉(zhuǎn)鐵蛋白的孵育溫度：4℃；濃度：1.25×10-8mol/L；時間：3

3、0min；加入順序：細胞與轉(zhuǎn)鐵蛋白孵育離心后再貼壁。實驗中用全內(nèi)反射熒光顯微鏡測定了胃癌細胞膜上轉(zhuǎn)鐵蛋白受體及其擴散。大量的未熒光標記的轉(zhuǎn)鐵蛋白與FITC標記的轉(zhuǎn)鐵蛋白同時加到細胞上表明受體結(jié)合蛋白的特異性。 Ⅲ.本論文的第三部分是全內(nèi)反射熒光顯微鏡檢測人胃癌細胞單個內(nèi)涵體的形成。這是首次用全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)測定了細胞中的內(nèi)吞轉(zhuǎn)鐵蛋白形成內(nèi)涵體的過程。實驗中以Alexa488標記的轉(zhuǎn)鐵蛋白4℃下與細胞膜上的受體結(jié)合，離心去除未結(jié)