原子力顯微鏡對人乳腺上皮細胞膜表面結(jié)構(gòu)的觀察.pdf

1、目的：在原子力顯微鏡下觀察正常乳腺、乳腺增生癥及乳腺癌上皮細胞膜的表面結(jié)構(gòu)，探討乳腺癌形成的機制。測量分析活體乳腺上皮細胞膜表面蛋白的分布情況，從而在一定程度上指導早期乳腺癌的診斷。 方法：獲取手術切除的人活體乳腺增生癥組織、乳腺癌組織、正常乳腺組織各15例，制成細胞印片，所有標本術前均未行任何抗腫瘤治療。將樣本用2％甲醛溶液固定，用蒸餾水反復沖洗，置于潔凈空間晾干。 樣本晾干后置于AFM載物臺上，利用Nikon倒置顯微

2、鏡觀察細胞的分散情況，選擇細胞進行掃描。選擇Tapping模式，調(diào)整激光與針尖重合，并將探測器的激光光斑置于中心圓點。在操作軟件中進行自動調(diào)頻，調(diào)節(jié)探針，直至針尖接觸到樣本開始掃描。每個病例掃描10個細胞，每個細胞分散掃描10個區(qū)域，掃描范圍為30μm～1μm，掃描頻率為0.5Hz～2Hz。 利用AFM圖像分析軟件，對掃描所得細胞膜表面結(jié)構(gòu)的圖像進行分析獲得數(shù)據(jù)平均粗糙度(Ra)、峰值(Peakcount)、高度差(Rp-v)，

3、并對其進行Kruskal Wallis檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果： AFM下觀察到三組細胞膜表面形態(tài)結(jié)構(gòu)：正常乳腺細胞膜表面相對平滑，突起較少，在膜上分布稀疏。乳腺增生癥細胞膜表面相對粗糙，突起較多，在膜上分布較密集。乳腺癌細胞膜表面更加粗糙，突起在膜上分布密集且有融合趨勢，表現(xiàn)為凸起直徑的增加。利用AFM圖像分析軟件對正常乳腺組、乳腺增生組、乳腺癌組細胞膜表面Ra、Peak Count和Rp-v進行測量，每組15

4、0個細胞，用SPSS13.0對所得參數(shù)進行統(tǒng)計(x±s)。1 正常乳腺組上皮細胞膜表面的Ra、Peak Count和Rp-v分別為9.554±2.001nm、13.180±4.040 nm、33.895±7.347 nm。2 乳腺增生組上皮細胞膜表面Ra、Peak Count和Rp-v分別為14.730±3.945 nm、15.647±5.583nm、47.527±14.014 nm。3 乳腺癌組上皮細胞膜表面Ra、Peak Count

5、和Rp-v分別為23.040±6.727 nm、16.560±6.227nm、78.436±35.841 nm。 統(tǒng)計分析上述數(shù)據(jù)，比較Ra、Rp-v，三組之間存在顯著性差異(P＜0.01)；比較Peak count，增生組和乳腺癌組之間不存在顯著差異(P＞0.05)。 用AFM軟件測量分析標本細胞膜表面的蛋白分布情況，從細胞膜表面的平均Ra、Peak Count和Rp-v的數(shù)據(jù)分析中可以看到，隨著乳腺上皮細胞從正常到增

6、生癥再到乳腺癌，膜表面的蛋白逐漸增多增大。這與其功能是相對應的，因為從正常乳腺到乳腺增生癥再到乳腺癌，細胞的活躍程度逐漸增加，而活躍程度的增加即可表現(xiàn)在細胞膜表面蛋白的變化上。 結(jié)論：本實驗在世界上首次采用AFM觀察人活體乳腺上皮細胞，觀察到當乳腺增生時，細胞膜表面的突起增加，突起的形態(tài)一致，突起在細胞表面排列細密，有一定的規(guī)則性；而當乳腺癌變時可見乳腺細胞膜表面的起伏和皺褶增多，突起大小不一，部分突起直徑增大，呈現(xiàn)出融合的趨勢