豬胰脂肪酶的分離純化及其催化制備光學戊醇的研究.pdf

1、目前，用于拆分外消旋化合物的酶多數(shù)是水解酶，而且絕大多數(shù)為脂肪酶。隨著非水介質(zhì)酶學的發(fā)展，非水介質(zhì)中酶催化反應正獲得越來越多的研究和應用，尤其是脂肪酶在非水有機溶劑中催化拆分制備手性物質(zhì)?！　≡陧椖拷M前期工作的基礎上，本文進一步研究了游離、固定化及鹽析純化后的豬胰脂肪酶(PPL酶)催化拆分三丁酸甘油酯與DL-2-甲基-1-丁醇的酯交換反應，發(fā)現(xiàn)豬胰脂肪酶的催化選擇性發(fā)生了變化，即由優(yōu)先催化(R)-2-甲基-1-丁醇的酯化反應轉為優(yōu)先催

2、化(S)-2-甲基-1-丁醇的酯化反應?！　∫蜇i胰脂肪酶的催化選擇性發(fā)生了改變，為得到目標產(chǎn)物(S)-2-甲基-1-丁醇，實驗用水解豬胰脂肪酶催化三丁酸甘油酯與DL-2-甲基-1-丁醇的酯交換反應產(chǎn)物(S)-丁酸異戊酯的方法，并比較了不同的水解體系和不同廠家的豬胰脂肪酶用于拆分后得的(S)-丁酸異戊酯的水解結果，最后得出選用Fluka公司的豬胰脂肪酶用于酯交換拆分，并直接往拆分分離后的(S)-丁酸異戊酯中加入氫氧化鈉的水溶液水解，用加

3、水萃取的方法分離最后產(chǎn)物(S)-2-甲基-1-丁醇的工藝最具有經(jīng)濟價值。　　實驗所用的豬胰脂肪酶實際為混合酶制劑，是由多種不同分子量的同源酶外加其它穩(wěn)定劑等雜質(zhì)的粗酶，各同源酶的催化活性和對底物的立體選擇性可能不盡相同。為深入了解豬胰脂肪酶選擇性催化的機理，實驗用鹽析、電泳、層析等方法對酶進行分離純化，分離出五個不同分子量區(qū)段的酶，并測定比較了不同分子量區(qū)段酶的活性。　　在實驗室研究規(guī)模上，單一手性的中間產(chǎn)物和/或最終產(chǎn)物，如(S)