玉米胚芽中谷氨酸脫羧酶性質(zhì)的研究及其γ-氨基丁酸的酶法富集.pdf

1、本論文對(duì)玉米胚谷氨酸脫羧酶(GAD)的分離純化、酶學(xué)特性等進(jìn)行了深入的研究,并應(yīng)用玉米胚GAD及其活性調(diào)節(jié)機(jī)制制備了高γ-氨基丁酸(GABA)玉米胚粉。
　　 在對(duì)GAD的分離純化過程中采用了CM纖維素離子柱層析和SephadexG-75凝膠柱層析,從玉米胚中分離得到一個(gè)較純的GAD組分,并經(jīng)SDS-PAGE測(cè)得玉米胚GAD亞基的相對(duì)分子質(zhì)量為57k。
　　 通過對(duì)玉米胚GAD酶學(xué)性質(zhì)的研究發(fā)現(xiàn)其最適反應(yīng)溫度為40℃,最

2、適反應(yīng)pH為5.7；且熱穩(wěn)定較差,85℃時(shí)酶幾乎完全失活；但pH穩(wěn)定性較好；玉米胚GAD對(duì)Glu的Km值為0.05187mol/L,Vmax的值為1.807mg/min。另外,研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)Ca2+濃度達(dá)到400μmol/L時(shí),對(duì)GAD活性的激活作用最強(qiáng),GAD的表觀米氏常數(shù)Km’為0.05013mol/L,小于玉米胚GAD對(duì)Glu的Km,說明Ca2+提高了底物與玉米胚GAD的親和力,對(duì)玉米胚GAD的活性確有較強(qiáng)的激活作用。
　　

3、在利用玉米胚GAD富集γ-氨基丁酸工藝條件的研究中,首先用正己烷對(duì)玉米胚芽進(jìn)行了低溫脫脂單因素試驗(yàn)；然后通過水浸泡法富集脫脂玉米胚中GABA,其工藝條件為:料水比1:40,反應(yīng)時(shí)間5h,溫度40℃,pH值5.7。在此工藝條件下添加600μmol/LCa2+可將GABA產(chǎn)量提高到4mg/g,比未富集時(shí)提高10倍；另外,還發(fā)現(xiàn)添加底物L(fēng)—Glu及GAD激活劑Ca2+、VB6是富集GABA的有效方法,其優(yōu)化反應(yīng)條件為:脫脂玉米胚與磷酸鹽緩沖液