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1、谷氨酸脫羧酶（GAD）有胰島B細胞的一種主要自身抗原,與1型糖尿病細胞免疫和體液免疫有密切關(guān)系,已廣泛應(yīng)用于臨床,作為糖尿病預(yù)測、診斷、分型、療效監(jiān)測的重要依據(jù).該研究首先用PCR方法,以pUC18/GAD<,65>為模板,擴增目的基因,克隆到pGEM-T載體中,構(gòu)建pGEM-T/GAD<,65>重組質(zhì)粒,然后用EcoRI酶切,切下的目的基因片段插入pET42a融合型表達載體中,經(jīng)酶切鑒定和測序,證實插入方向、讀碼框架正確;重組表達質(zhì)粒
2、轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（ED<,3>）中誘導(dǎo)表達,表達產(chǎn)物經(jīng)親和層析純化后獲得了融合蛋白GST-CAD<,65>.SDS-PAGE電泳和Western Blot分別鑒定融合蛋白大小和免疫活性后,對表達條件進行優(yōu)化,對包涵體進行分離、溶解和復(fù)性處理,以提高可溶性融合蛋白的產(chǎn)量,使融合蛋白達總蛋白的50﹪,相關(guān)于1.495g/每升培養(yǎng)物.我們利于原核表達系統(tǒng)成功克隆并表達了具有免疫活性的大鼠腦GAD<,65>基因,并對表達條件進行優(yōu)化,為今后
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