福建色素紅曲去桔霉素毒素的菌種改造.pdf

1、以福建色素紅曲MQ-01為出發(fā)菌株,采用改良的CTAB法提取其基因組DNA。根據(jù)Genebank公布的Monascus purpureus合成桔霉素的關鍵酶編碼基因的DNA序列為基礎,設計引物,并以紅曲菌株MQ-01基因組DNA為模板,通過PCR擴增出合成桔霉素的關鍵酶的編碼基因。將合成桔霉素關鍵酶的編碼基因的DNA插入到質粒pBluescript sk(+)中,轉化到E.coli DH5α中,并對轉化子DNA測序。結果顯示,此DNA序

2、列正是合成桔霉素關鍵酶的編碼基因DNA序列。將已構建的載體通過酶切,與pCSN43的trpC基因啟動子和Hygromycin B(潮霉素B)抗性基因hph序列連接,并轉化到JM109中。制備紅曲菌株MQ-01的原生質體,然后通過限制性內切酶介導轉化,通過潮霉素B抗性篩選出轉化子,得到改造菌株MN-02。
　　 為了比較原始菌株MQ-01和改造菌株MN-02的產(chǎn)色素水平和桔霉素含量,本試驗采用固體培養(yǎng)和液體發(fā)酵兩種方法進行培養(yǎng)后,

3、檢測其產(chǎn)色素水平和桔霉素含量。結果顯示:與原始菌株MQ-01的相比,改造菌株MN-02采用兩種不同的方法培養(yǎng),其產(chǎn)紅曲色素色價水平?jīng)]有降低,還略有提高。固體發(fā)酵色價提高了30.5 U/g,提高率4.05％,液體發(fā)酵色價提高率17.85 U/g,提高了10.53％。原始菌株MQ-01固態(tài)培養(yǎng)桔霉素含量為32.875μg/g,液態(tài)發(fā)酵桔霉素含量為20.25μg/ml;而改造菌株MN-02采用兩種不同的培養(yǎng)方法,在本試驗的條件下桔霉素均未檢出