牛奶介質(zhì)中混合菌生物被膜形成特性及其抑制的研究.pdf

1、在食品加工過程中，由于生物被膜的存在讓細菌更難清除而引發(fā)大量的食品腐敗以及食品污染等安全問題。很多學者深入研究單一菌生物被膜，證實群體感應系統(tǒng)在生物被膜的形成中發(fā)揮非常重要的作用。然而很少有人研究混合菌生物被膜中菌群結構以及菌體間相互影響的關系，種間群體感應信號分子在混合菌生物被膜中的作用的研究更為罕見。本研究以牛奶中混合菌形成的生物膜為研究對象，探討不同條件下該生物被膜形成能力以及比較混合菌生物被膜中菌體間的相互影響。初步探討群體感應

2、信號分子AI-2在混合菌生物被膜中的作用，以及部分天然產(chǎn)物抑制混合菌生物被膜形成的特征。
　　本課題通過設置不同牛奶保存條件，研究食源性細菌（銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌以及沙門氏菌）混合菌生物被膜形成能力，生物被膜中各菌株活菌組成以及混合菌形成AI-2活力之間的關系。利用菌體上清液以及三種不同天然產(chǎn)物（茶多酚、檸檬醛以及肉桂醛）影響生物被膜形成能力分析AI-2對生物被膜形成的影響。最后通過水果提取物探討食品加工中新型生

3、物被膜抑制劑的可能。主要研究結果如下:
　　1、利用微孔板法測定四種單菌生物被膜及其混合菌生物被膜形成能力，發(fā)現(xiàn)菌體的粘附率大小關系是:混合菌＞金黃色葡萄球菌＞銅綠假單胞菌＞大腸桿菌＞沙門氏菌。通過模擬牛奶腐敗條件，證實混合菌生物被膜形成的最佳培養(yǎng)時間為3天，最佳培養(yǎng)溫度是30℃，四種混合菌最佳接種比例是1∶1∶1∶1。
　　2、通過對生物被膜進行活菌計數(shù)發(fā)現(xiàn)不同培養(yǎng)時間下，對同一種菌株來講，單一培養(yǎng)形成的生物被膜和混合培養(yǎng)

4、形成的生物被膜中該菌的活菌數(shù)目變化趨勢不同，混合菌生物被膜中優(yōu)勢細菌也在隨時間改變，存在菌群更替的現(xiàn)象。利用V.harveyi BB170生物發(fā)光實驗測定不同時間下混合菌產(chǎn)生AI-2活力，發(fā)現(xiàn)混合菌AI-2相對活力在第2天時最小，僅為第1天的0.17倍。在第3天時最大，為第1天的2.28倍。SPSS軟件分析證實不同時間下混合菌生物被膜形成能力、活菌總數(shù)以及AI-2活力三者具有相關性。
　　3、通過在單一菌株培養(yǎng)中加入菌株無菌培養(yǎng)上

5、清液，證實所有上清液都具有增加生物被膜形成能力的效果。其中加入金黃色葡萄球菌上清液后大腸桿菌生物被膜形成能力變?yōu)樵瓉淼?倍。三種天然產(chǎn)物對混合菌生物被膜形成以及AI-2活力的影響結果表明，茶多酚、檸檬醛、肉桂醛對于三種細菌及其混合菌的生物被膜形成能力均有抑制作用。茶多酚對金黃色葡萄球菌抑制效果最好，肉桂醛對大腸桿菌和沙門氏菌的抑制效果最好，而檸檬醛對細菌AI-2活力抑制效果最好。
　　4、研究呋喃酮對混合菌生物被膜形成的影響，發(fā)現(xiàn)