臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞抑制氣管導(dǎo)管生物被膜形成的研究.pdf

1、目的：
　　呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎（Ventilator-associated pneumonia,VAP）是導(dǎo)致新生兒死亡的主要疾病之一，其主要原因是氣管導(dǎo)管生物被膜（Biofilms，BF）形成，影響抗生素的殺菌能力。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUCMSCs）具有分泌抗菌肽的功能，將為臨床治療VAP提供了應(yīng)用前景。本研究將hUCMSCs與銅綠假單胞菌(P

2、seudomonas aeruginosa，PA)共培育，探討hUCMSCs濃度對(duì)分泌抗菌肽水平的影響，及其對(duì)氣管導(dǎo)管表面BF形成以及基因表達(dá)的影響。
　　對(duì)象與方法：
　　1、為探討hUCMSCs濃度對(duì)分泌抗菌肽水平的影響，配制8組濃度梯度的hUCMSCs細(xì)胞懸液（分別為1×104/ml，5×104/ml，1×105/ml，5×105/ml，1×106/ml，5×106/ml，1×107/ml，5×107/ml），分別與3

3、×104CFU/ml的PA菌懸液共培育6小時(shí)，高速離心、過濾細(xì)胞成分，收集上清液。統(tǒng)計(jì)分析hUCMSCs濃度與抗菌肽（LL-37和HBD-2）的濃度的關(guān)系。
　　2、為探討PA濃度對(duì)hUCMSCs分泌抗菌肽水平的影響，配制7組濃度梯度的PA菌懸液（5×102CFU/ml，5×103CFU/ml，5×104CFU/ml，5×105CFU/ml，5×106CFU/ml，5×107CFU/ml，5×108CFU/ml），分別與1×106

4、/ml的hUCMSCs細(xì)胞懸液共培育6小時(shí)，高速離心、過濾細(xì)胞成分，收集上清液。
　　3、根據(jù)試驗(yàn)1、2的結(jié)果，確定hUCMSCs與PA共培育的最佳濃度，將PA菌株配制成菌懸液，實(shí)驗(yàn)組PA與hUCMSCs共培育，空白組PA與細(xì)胞培養(yǎng)基共培育，6小時(shí)后離心并濾取上清液。將實(shí)驗(yàn)組與空白組上清液分別與BF氣管導(dǎo)管體外模型共培育，7天后結(jié)晶紫染色定量分析兩組氣管導(dǎo)管表面BF形成量的差異，分析兩組細(xì)菌泳動(dòng)能力的差異，電子顯微鏡分析BF形態(tài)差

5、異，基因芯片分析BF相關(guān)基因的表達(dá)差異。
　　結(jié)果：
　　1、當(dāng)PA濃度固定為5×106CFU/ml時(shí)，抗菌肽水平隨著hUCMSCs細(xì)胞濃度升高而升高，當(dāng)hUCMSCs濃度為5×106/ml時(shí)，抗菌肽濃度最高（LL-37為7.96±0.15ng/ml，HBD-2為1.83±0.17pg/ml）。當(dāng)hUCMSCs濃度固定為1×106/ml時(shí)，抗菌肽水平隨著PA濃度升高而升高，當(dāng)PA濃度達(dá)5×106CFU/ml時(shí)，抗菌肽濃度最高

6、（LL-37為7.00±0.11ng/ml，HBD-2為1.96±0.13pg/ml）；當(dāng)PA濃度大于5×106CFU/ml時(shí)，上清液抗菌肽水平與PA的濃度呈負(fù)相關(guān)。
　　2、hUCMSCs受到PA的刺激后，能分泌抗菌肽至上清液中，實(shí)驗(yàn)組上清液中LL-37與HBD-2濃度分別為6.89±0.41 ng/ml與1.89±0.53ng/ml，空白組上清液中LL-37與HBD-2濃度分別為3.59±0.44ng/ml與0.67±0.54

7、ng/ml，兩組上清液比較，其中LL-37與HBD-2濃度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　在BF定量分析實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組OD595值為0.303±0.066，空白組OD595值為0.435±0.125，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)組較空白組減少約30％的BF形成量。
　　在PA附著實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組OD595值為0.353±0.018，空白組OD595值為0.495±0.023，實(shí)驗(yàn)組PA附著較空白組減