林可霉素生物合成的調(diào)控與改造研究.pdf

1、林可霉素是林可鏈霉菌（Steptomyceslincolnensis）產(chǎn)生的一種林可酰胺類抗生素，主要用于治療革蘭氏陽性菌引起的感染性疾病。林可霉素由4-丙基脯氨酸（PPL）和α-甲硫基林可酰胺（MTL）通過縮合反應生成去甲基林可霉，進一步甲基化而生成。林可霉素生物合成涉及30個基因，然而大部分基因的功能主要局限在序列比對和生物信息學分析，通過實驗研究確定基因功能對于林可鏈霉菌基因改造和提高林可霉素發(fā)酵產(chǎn)量具有十分重要的意義。
　

2、　本文首次建立并優(yōu)化了大腸桿菌-林可鏈霉菌菌絲體接合轉(zhuǎn)移方法，其中最佳條件為，在含有10.3％蔗糖SM液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)3d，菌絲與大腸桿菌在含有20mMMgCl2的MS固體培養(yǎng)基進行接合轉(zhuǎn)移。該方法簡便、高效，適合于林可鏈霉菌等孢子形成較少或不適做孢子接合轉(zhuǎn)移鏈霉菌的遺傳轉(zhuǎn)化。
　　本文構(gòu)建了lmbU、lmbD、lmbV、lmbW的敲除菌株，研究了對林可霉素生物合成基因簇轉(zhuǎn)錄和效價的影響。結(jié)果表明lmbU、lmbD、lmbV是林可

3、霉素生物合成的全局正調(diào)控基因，影響PPL合成基因、MTL合成基因、抗性基因、其它基因的轉(zhuǎn)錄水平。敲除lmbW，只能合成林可霉素B而無A組分，首次實驗確證了lmbW基因的功能是負責PPL合成支路中，對乙烯基支鏈進行甲基化生成丙基支鏈。
　　本文構(gòu)建了lmrABC、lmbGHIJ、lmbW、lmbUYX基因過表達菌株，表明增加這些基因的拷貝數(shù)對提高林可霉素的產(chǎn)量具有很重要的意義。過表達S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因metK和透明顫菌血紅蛋