產(chǎn)堿桿菌CzcD基因的克隆，表達(dá)以及功能的初步研究.pdf

1、CzcD基因位于產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes eutrophus)CH34的質(zhì)粒pMLO30上，研究表明：該基因編碼的蛋白質(zhì)是Alcaligenes eutrophus CH34中czc離子泵出系統(tǒng)中的一員，該系統(tǒng)主要通過(guò)CzcA，B，C成員完成對(duì)重金屬的泵出、轉(zhuǎn)運(yùn)等過(guò)程，從而增強(qiáng)菌株對(duì)某些重金屬的抗性。而CzcD對(duì)CzcA，B，C的表達(dá)有誘導(dǎo)作用。本論文以產(chǎn)堿桿菌菌株CH34的質(zhì)粒為模板，經(jīng)PCR擴(kuò)增得到CzcD基因；并轉(zhuǎn)化大腸桿

2、菌BL21菌株，研究其誘導(dǎo)表達(dá)情況。同時(shí)，為了檢測(cè)蛋白質(zhì)CzcD是否具有一定的重金屬抗性，通過(guò)設(shè)計(jì)相應(yīng)的陰陽(yáng)性對(duì)照，將各種菌株在不同濃度的重金屬培養(yǎng)基中培養(yǎng)，檢測(cè)OD600值以觀察各細(xì)菌的生長(zhǎng)狀況，發(fā)現(xiàn)在CzcD蛋白質(zhì)的作用下，轉(zhuǎn)入CzcD基因的工程菌較野生型菌株的生長(zhǎng)量大，具有相對(duì)較強(qiáng)的重金屬抗性。本文為研究細(xì)菌對(duì)重金屬的抗性機(jī)理，以及構(gòu)建具有重金屬抗性的工程菌來(lái)高效凈化環(huán)境中重金屬的污染提供一定的理論基礎(chǔ)。 本論文研究得到以

3、下結(jié)果： 1.PCR擴(kuò)增得到了CzcD基因，將其轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21菌株，得到PETCZCD菌株。當(dāng)該菌液的OD600值達(dá)到1.0，培養(yǎng)溫度為37℃時(shí)，在終濃度為1.0mM的IPTG誘導(dǎo)下，蛋白有較高的表達(dá)量。 2.得到不同類型的陰，陽(yáng)性對(duì)照菌株：對(duì)產(chǎn)堿桿菌CH34的野生菌做質(zhì)粒消除實(shí)驗(yàn)得到菌株ΔCH34。PETCZCD菌株提取質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到ΔCH34中得到菌株JH。pET-28(a)空載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21得到菌株P(guān)ET