雙酶固定化技術制備玉米活性肽研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、酶固定化技術使酶分子與載體材料多點連接,可有效避免酶變形及自溶現(xiàn)象,從而顯著提高穩(wěn)定性。采用復合載體進行雙酶固定化不僅能彌補單一載體的不足,還能利用雙酶的優(yōu)勢提高酶解效率。為了研究固定化雙蛋白酶制備活性肽技術,提高酶解效率,本文對復合載體固定化雙蛋白酶(Double proteases immobilized within alginate-chitosan,ACDP)和雙蛋白酶聚集體(Crosslinked enzyme aggreg

2、ates,CLEAs)的性質和應用進行了系列研究。
  首先,在復合載體固定化雙酶(ACDP)制備玉米活性肽(Corn Peptides,CPs)方面,研究了利用堿性蛋白酶和胰蛋白酶,以海藻酸鈉-殼聚糖為復合載體,以玉米醇溶蛋白(zein)為底物制備玉米活性肽CPs。探究了傳統(tǒng)方法與ACDP方法對zein的降解效果,確定了ACDP的最佳制備工藝,對zein降解水解度比傳統(tǒng)方法更高;對酶解物玉米粗肽進行了分離純化得到五個不同分子量分

3、布范圍的CPs組分(F1:>6 kDa,F(xiàn)2:4 kDa-6 kDa,F(xiàn)3:<4 kDa,CPs-1,CPs-2),對五種CPs組分進行抗氧化活性及降血壓活性分析,結果表明分子量范圍分布越小,抗氧化及降血壓活性越好。活性肽組分CPs-1和CPs-2的DPPH自由基清除活性的IC50分別為0.47和0.23mg/mL;CPs-2具有79.34%的體外降血壓活性,灌胃10mg/kg的CPs-2的SHRs12 h后SBP下降44.6mm Hg

4、,DBP下降10.2mm Hg。因此,利用海藻酸鈉-殼聚糖復合載體固定化雙酶技術可制備具有良好生物活性的玉米肽。
  其次,在交聯(lián)雙蛋白酶聚集體(CLEAs)方面,本文將中性蛋白酶和木瓜蛋白酶在沉淀劑乙醇的作用下沉淀,并采用戊二醛進一步將雙蛋白酶進行交聯(lián),制備得到中性蛋白酶-木瓜蛋白酶聚集體。確定了最佳沉淀劑乙醇,雙酶液/戊二醛為1/5,最佳交聯(lián)時間為4h,所得酶聚集體較游離態(tài)蛋白酶穩(wěn)定性高,適用于水溶性黃豆、綠豆、紅豆和黑豆蛋白

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