分支桿菌噬菌體D29裂解酶gp10的克隆表達(dá)及抗菌活性鑒定.pdf

1、研究目的：克隆表達(dá)分支桿菌噬菌體D29裂解酶gp10，觀察該重組裂解酶對(duì)膿腫分支桿菌等多重耐藥菌的抑菌作用，為開(kāi)發(fā)治療多重耐藥菌感染的藥物打下基礎(chǔ)。
　　 方法：以噬菌體D29基因組DNA為模板，用PCR擴(kuò)增gp10基因片段，克隆入PET32a質(zhì)粒，構(gòu)建重組原核表達(dá)載體PET32a-gp10，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。SDS-PAGE分析表達(dá)蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量和表達(dá)形式，離子交換層析純化重組蛋白后，用杯碟法測(cè)定其

2、抗菌活性。
　　 結(jié)果：PCR擴(kuò)增獲得長(zhǎng)1454bp的gp10基因片段，經(jīng)PCR、雙酶切及測(cè)序證明重組質(zhì)粒PET32a-gp10構(gòu)建正確。SDS-PAGE顯示表達(dá)蛋白相對(duì)分子量約為54.8KD，與預(yù)期相符；目的蛋白在表達(dá)上清，碎菌上清和碎菌沉淀中均可見(jiàn)，純化后均一性可達(dá)90％。杯碟法測(cè)定重組蛋白對(duì)膿腫分支桿菌出現(xiàn)抑菌環(huán)，對(duì)金黃色葡萄球菌沒(méi)有抑菌環(huán)。
　　 結(jié)論：重組分支桿菌噬菌體D29裂解酶gp10對(duì)膿腫分支桿菌有明顯的