海洋產(chǎn)多糖細(xì)菌的篩選及多糖發(fā)酵的研究.pdf

1、近年來,隨著海洋資源的開發(fā)和應(yīng)用,海洋多糖,尤其是海洋細(xì)菌多糖已經(jīng)越來越引起科研工作者的注意。本論文從樣本采集、菌種的分離純化、產(chǎn)多糖菌株篩選、種屬鑒定、親緣關(guān)系構(gòu)建、發(fā)酵條件優(yōu)化、多糖分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定等多個(gè)方面對(duì)海洋細(xì)菌502A(Aerococcus urinaeequi HZ)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。其結(jié)果主要如下:
　　1.本實(shí)驗(yàn)從鮑魚養(yǎng)殖環(huán)境篩選出活性菌株228株,采用苯酚-硫酸法檢測得到產(chǎn)多糖菌株23株,其中8株細(xì)菌的多糖的

2、產(chǎn)量超過了0.5g/L,進(jìn)行多次重復(fù)實(shí)驗(yàn),從其中篩選出1株生長周期短、產(chǎn)量穩(wěn)定的菌株命名為502A,經(jīng)染色檢測為革蘭氏陰性菌,長桿狀,在Zobell2216E固體培養(yǎng)基菌落較大(直徑>2MM),菌落乳白色,圓形,隆起,邊緣較圓整,不透明,無遷移性。經(jīng)過16SrDNA序列比對(duì),及NCBI檢索,確定其種屬為Aerococcus urinaeequi,并對(duì)其親緣關(guān)系進(jìn)行了構(gòu)建。
　　2.在已有單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,對(duì)菌株502A發(fā)酵生產(chǎn)多糖

3、的培養(yǎng)基組分進(jìn)行正交優(yōu)化,結(jié)果為3％蔗糖、0.25％牛肉膏和3％的海鹽;通過Plackett-BurMan實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)從眾多發(fā)酵因素中篩選出影響較顯著的因素:培養(yǎng)時(shí)間、溫度和搖床轉(zhuǎn)速,并通過中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),用響應(yīng)面方法優(yōu)化得到最佳發(fā)酵條件為搖床轉(zhuǎn)速230rpM,26℃,培養(yǎng)35小時(shí),多糖最高產(chǎn)量為2.34g/L。
　　3.采用水提醇沉的方法提取發(fā)酵液中的粗多糖,并通過Sevage試劑除去粗多糖中的蛋白質(zhì),經(jīng)紫外掃描檢測無蛋白和核酸殘

4、留后,多糖樣品過DEAE-52柱和Sephadex G100柱進(jìn)一步除雜純化,通過高效凝膠滲透色譜(HPGPC)檢測多糖的相對(duì)純度均一,并測得其重均分子量Mn=2.84×105,數(shù)均分子量Mw=2.22×105,分布系數(shù)為1.28。
　　4.經(jīng)GC-MS、IR、NMR分析可得,EPS-1主要由木糖、葡萄糖、甘露糖和阿拉伯糖組成,并含有少量的葡萄糖甙、半乳糖和甘油醛且均為β構(gòu)型。
　　海洋細(xì)菌生活在低溫環(huán)境中,多糖合成所需要的