新型產(chǎn)胞外多糖細菌的篩選及其多糖結(jié)構(gòu)的探究.pdf

1、微生物胞外多糖因為具有安全性高、生產(chǎn)周期短和經(jīng)濟效益好的優(yōu)點越來越引起人們的關(guān)注，各種胞外多糖產(chǎn)品被應用于食品、醫(yī)藥、工業(yè)、環(huán)保等多個領(lǐng)域。篩選出新型產(chǎn)胞外多糖細菌和發(fā)現(xiàn)新型胞外多糖是開發(fā)其應用的基礎(chǔ)與前提。本論文以篩選出可以分泌出具有應用潛力的胞外多糖的新細菌為出發(fā)點，同時也期望能夠通過優(yōu)化培養(yǎng)條件增加其多糖產(chǎn)量。
　　本論文采用選擇性培養(yǎng)基進行初篩，搖瓶液體培養(yǎng)方法進行復篩，共篩選出了5株胞外多糖產(chǎn)生菌。其中從江西省上饒市玉山

2、縣三清山山腳闊葉林土壤樣品中獲得菌株在相同發(fā)酵時間內(nèi)胞外多糖產(chǎn)量最大，結(jié)合鏡檢、革蘭氏染色、不同pH生長情況與耐鹽性范圍等生理、生化試驗和比對其16SrDNA序列確定該菌株為類芽孢桿菌屬新種，命名為Paenibacillussp.44051，構(gòu)建了該菌16SrDNA系統(tǒng)發(fā)育樹。
　　用搖瓶培養(yǎng)Paenibacillussp.44051菌進行發(fā)酵產(chǎn)糖，通過單因素試驗確定了該菌株產(chǎn)胞外多糖最佳的碳源為可溶性淀粉(4％)、最佳氮源為KN

3、O3(0.2％)。最佳的發(fā)酵培養(yǎng)條件為:初始pH7.0、溫度30℃、裝液量50mL/250mL、接種量10％。3-36h為該菌的對數(shù)生長期，穩(wěn)定生長期出現(xiàn)在36-78h，78h后細菌進入衰亡期，同時發(fā)酵液粘度下降。該菌株利用可溶性淀粉的最終產(chǎn)物為酸性物質(zhì)，致使發(fā)酵液pH在96h內(nèi)從7.0緩慢下降至5.8。搖瓶發(fā)酵78h后其多糖產(chǎn)率可達1.46％。
　　測定胞外多糖的化學組成，發(fā)現(xiàn)其總糖含量高達74.05％、其他成分為:水分4.21

4、％、灰分10.67％、蛋白與核酸等雜質(zhì)11.07％;該多糖在熱水中溶解度為0.683g/100gH2O;胞外多糖粘度隨著溫度的升高而降低，80℃時粘度僅為34mPas。將粗多糖進行純化，采用鹽酸法脫除蛋白、透析除鹽及冷凍干燥。用完全酸水解法水解純化后的多糖，通過薄層色譜分析得出該多糖分子由一種單糖組成，很可能為甘露糖。采用傅里葉變換紅外光譜分析多糖的特殊吸收峰，確定該多糖構(gòu)型為α-吡喃糖苷鍵型。
　　綜上所述，Paenibacil