凝血因子Ⅷ分離過程中效價衰減的初步分析.pdf

1、目的：
　　開展原料血漿篩選、速凍、融漿循環(huán)保溫系統控制等方面的研究，從源頭保護凝血因子Ⅷ制品的生物學活性，控制效價衰減。通過對凝血因子Ⅷ純化過程中導致其效價衰減的內外環(huán)境因素的分析，對制備工藝過程進行最大程度的優(yōu)化，得到凝血因子Ⅷ的最佳純化條件。
　　方法：
　　1.通過單因素實驗及正交實驗確定能夠保證凝血因子Ⅷ效價最高的前處理條件，實驗中分別對血漿的速凍和保存溫度、融漿溫度、冷沉淀制取過程中的離心溫度、離心機轉速四

2、個因素進行了單因素實驗，研究了這四個因素對凝血因子Ⅷ效價的影響情況和最佳的冷沉淀制備條件。
　　2.為防止凝血因子Ⅷ在后續(xù)非低溫條件被大量激活，選擇合適條件的緩沖液溶解冷沉淀。通過實驗確定去除溶液中纖維蛋白原和纖維結合蛋白的酸堿度調節(jié)的條件，以及通過吸附法去除其中等電點較低的小分子雜質。
　　3.采用離子交換技術分離純化制品，通過冷凍干燥參數設計對單因素條件進行正交實驗優(yōu)選，根據效價衰減情況選擇最優(yōu)化的凝血因子Ⅷ分離純化方案

3、。
　　4.各步實驗得到的半制成品、制成品的凝血因子Ⅷ的效價評價方法均采用全自動凝血儀檢測。
　　結果：
　　1.前處理過程中對凝血因子Ⅷ生物學活性有影響的四個因素的研究結果表明：速凍和保存溫度-40℃，融漿循環(huán)保溫系統溫度2℃，冷沉淀制取過程中的離心溫度4℃，離心機的離心力2500 g，凝血因子Ⅷ效價最高。
　　2.冷沉淀選擇具有抗凝作用的檸檬酸鈉溶解，稀釋倍數1：6。去除雜蛋白酸堿度調節(jié)在pH6.5時凝血因子

4、Ⅷ效價損失較小，纖維蛋白原和纖維結合蛋白去除率較高；去除其他小分子雜質選用的吸附劑為二乙基氨基乙基-葡聚糖 A-50凝膠凝血因子Ⅷ效價損失最低。
　　3.離子交換技術中采用DEAE-650（M）弱堿性陰離子交換劑，其他雜質蛋白去除較充分。冷凍干燥的最佳條件為預凍4 h，升華干燥溫度-15℃，時間36 h，真空壓力設為30 Pa，解析干燥溫度36℃，真空壓力設為5 Pa。經上述制備過程，凝血因子Ⅷ效價損失最小，終產品的因子Ⅷ效價為7

5、9.31 IU/mg。
　　結論：
　　1.制備血漿冷沉淀的過程中，原料血漿速凍溫度和保存溫度設定為-40℃，融漿溫度設定為2℃，離心溫度設為4℃，離心機的離心力2500 g，得到的冷沉淀中凝血因子Ⅷ效價最高。
　　2.冷沉淀與緩沖液的混合比例設定在1：6，將血漿冷沉淀溶解在檸檬酸鈉緩沖液中效果最好。
　　3.pH6.5時沉淀法除去纖維蛋白原和纖維結合蛋白等大分子雜蛋白，A-50凝膠吸附法去除其它小分子量的凝血因