皖南尖吻蝮蛇毒中凝血因子Ⅸ-Ⅹ結(jié)合蛋白的分離、純化及性質(zhì)的初步研究.pdf

1、凝血因子Ⅸ/Ⅹ結(jié)合蛋白存在于蝰科蛇毒中，它們不具有酶活性，通過(guò)與凝血因子Ⅸ/Ⅹ結(jié)合來(lái)延長(zhǎng)凝血時(shí)間。皖南尖吻蝮蛇毒中抗凝血因子Ⅰ(ACFⅠ)、抗凝血因子Ⅱ(ACFⅡ)和抗血小板凝集素(agkisacutacin)都是凝血因子Ⅸ/Ⅹ結(jié)合蛋白家族的成員。本文對(duì)ACFⅠ、ACFⅡ和agkisacutacin的分離純化、金屬離子的半徑和離子勢(shì)對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的影響進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。 1.GdnHCl誘導(dǎo)RE3+重組ACFⅡ的去折疊過(guò)程遵

2、循三態(tài)機(jī)制，有一個(gè)穩(wěn)定的中間態(tài)。RE3+取代ACFⅡ中Ca2+降低其天然態(tài)的穩(wěn)定性，同時(shí)顯著增強(qiáng)其中間態(tài)的穩(wěn)定性。首次發(fā)現(xiàn)ACFⅡ中間態(tài)去折疊過(guò)程中自由能變化隨金屬離子的離子勢(shì)增大呈線性增加。RE3+誘導(dǎo)ACFⅡ重新折疊過(guò)程中至少存在兩個(gè)折疊相，金屬離子半徑在RE3+誘導(dǎo)ACFⅡ重折疊快反應(yīng)中起主導(dǎo)作用，而金屬離子的離子勢(shì)在維持ACFⅡ中間態(tài)的穩(wěn)定性時(shí)起主導(dǎo)作用。 2.GdnHCl誘導(dǎo)Mg2++ACFⅠ、Sr2+-ACFⅠ和Ba

3、2+-ACFⅠ的去折疊反應(yīng)均是一個(gè)兩態(tài)過(guò)程。堿土金屬離子中只有與鈣離子半徑最接近的Sr2+可以使ACFⅠ與FⅩa發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。ACFⅠ利用其分子表面的凹隙部位與凝血因子Ⅸ/Ⅹ分子中Gla區(qū)結(jié)合，金屬離子半徑影響ACFⅠ分子表面的特定凹隙結(jié)構(gòu)。 3.純化的agkisacutacin分子中含有一個(gè)Ca2+離子，其GdnHCl誘導(dǎo)的去折疊反應(yīng)是一個(gè)兩態(tài)過(guò)程。當(dāng)脫去鈣離子后，agkisacutacin去折疊過(guò)程中自由能△G0下降，當(dāng)結(jié)合