人凝血因子Ⅷ分離純化工藝研究.pdf

1、人凝血因子Ⅷ(human coagulation factorⅧ，F(xiàn)Ⅷ)是人血漿中一種非常重要的凝血因子，其缺失或缺乏會(huì)引起不同程度的甲型血友病--一種X連鎖隱性遺傳的出血性疾病，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)＜盎颊叩纳?。甲型血友病是一種終生性疾病，目前仍沒有根治的方法，只能通過輸注FⅧ產(chǎn)品進(jìn)行替代性治療。只要能及時(shí)輸注FⅧ產(chǎn)品，甲型血友病患者也能如正常人一般生活甚至參加激烈的體育運(yùn)動(dòng)。但是目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上的FⅧ產(chǎn)品嚴(yán)重不足，不能充分供給國(guó)內(nèi)甲型血友病

2、患者的使用，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)斷藥的情況，危害國(guó)內(nèi)患者的健康和生命安全。
　　 FⅧ是已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)藥，隨著國(guó)內(nèi)經(jīng)濟(jì)收入的逐年增長(zhǎng)以及蛋白分離技術(shù)的飛速發(fā)展，國(guó)內(nèi)已有少數(shù)幾個(gè)廠家開始生產(chǎn)FⅧ產(chǎn)品，我們泰邦公司也開始開發(fā)FⅧ的分離純化工藝，以期能為血友病患者提供更多安全、有效的藥品。
　　 FⅧ分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜，分子量為330kDa，是一種較大的血漿蛋白分子。但在血漿中的含量?jī)H為0.1-0.2μg/ml，半衰期約為12 h，因此其提取技

3、術(shù)非常困難。我們經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)摸索，以及生產(chǎn)規(guī)模放大試產(chǎn)，得出了一條較為可行的FⅧ生產(chǎn)工藝：以人新鮮冰凍血漿低溫離心后冷沉淀為起始原料，用適量的肝素鈉溶解液溶解，在適當(dāng)?shù)臏囟葪l件下降低溶解液pH，沉淀大部分的纖維蛋白原和纖維結(jié)合蛋白；離心收獲上清液，進(jìn)行6 h有機(jī)溶劑/去污劑(solvent/detergent，S/D)病毒滅活：進(jìn)行Toyopearl DEAE650M弱陰離子交換層析，先用洗滌液洗去大量的雜蛋白，然后用合適的洗脫液

4、洗脫收集FⅧ；洗脫液經(jīng)超濾透析后配制至適當(dāng)?shù)囊?guī)格，進(jìn)行冷凍干燥，凍干后制品經(jīng)100℃30min干熱滅活，得FⅧ成品。
　　 本工藝生產(chǎn)的FⅧ產(chǎn)品目前已經(jīng)完成臨床實(shí)驗(yàn)，臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果良好，治療后患者血液中FⅧ活性水平有明顯升高，用藥后10 min FⅧ：C達(dá)到161.89％，用藥后1 h達(dá)到112.98％；并且治療后臨床癥狀有較大改善，其改善率達(dá)到93％(其中優(yōu)良31.6％，改善61.4％)。
　　 根據(jù)中國(guó)食品藥品檢定研究

5、院的檢驗(yàn)結(jié)果，本工藝生產(chǎn)的FⅧ產(chǎn)品多項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于《中國(guó)藥典》的最低標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，已有檢測(cè)項(xiàng)目均高于《歐洲藥典》的最低標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。送檢三批產(chǎn)品復(fù)溶時(shí)間都不高于2 min，僅為《中國(guó)藥典》規(guī)定的1/15；比活性更是高達(dá)≥41.7IU/mg蛋白，高于《中國(guó)藥典》規(guī)定的41.7倍；抗A、抗B血凝素不高于1:4，僅為《中國(guó)藥典》規(guī)定的1/16，聚山梨酯-80殘留量不高于61μg/ml，為《中國(guó)藥典》規(guī)定的1/16，磷酸三丁酯殘留量不高于3μg/ml，低