重組人凝血因子Ⅶ在真核細(xì)胞中的表達(dá)研究.pdf

1、人凝血因子Ⅶ(human coagulation factorⅦ,hFⅦ)是一種維生素K依賴的單鏈糖蛋白,在體內(nèi)凝血過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用.重組人活性凝血因子Ⅶ(rhFⅦa)在血管損傷處與組織因子結(jié)合產(chǎn)生足夠的凝血酶,從而觸發(fā)凝血瀑布.1999年,rhFⅦa由美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市(NovoSeven(R)),主要適應(yīng)癥是存在FⅧ和FⅨ抑制物的血友病、先天性和獲得性FⅦ缺乏癥等.最近的臨床研究表明,rhFⅦ對(duì)血小板減少癥和血小板功能障礙、嚴(yán)

2、重創(chuàng)傷、大面積外科手術(shù)的止血具有令人滿意的止血效果.FⅦ用于全身止血幾乎沒(méi)有毒副作用,為FⅦ的發(fā)展和應(yīng)用展現(xiàn)了極為良好的前景,對(duì)戰(zhàn)傷救治具有極為重要的應(yīng)用價(jià)值.該實(shí)驗(yàn)首先對(duì)FⅦ在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)做了初步的研究.首先從質(zhì)粒pUC19/FⅦ中用PCR的方法擴(kuò)增出FⅦcDNA片段,構(gòu)建表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染兩種不同的細(xì)胞:CHO和BHK.濃縮純化表達(dá)產(chǎn)物并進(jìn)行相關(guān)檢測(cè).結(jié)果表明,獲得了穩(wěn)定表達(dá)FⅦ蛋白的兩種細(xì)胞株,表達(dá)產(chǎn)物具有凝血活性,可以被凝血