中國(guó)對(duì)蝦貯藏保鮮過(guò)程中肌肉蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、中國(guó)對(duì)蝦是我國(guó)最主要的對(duì)蝦品種之一，具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、消費(fèi)量大，在我國(guó)廣泛養(yǎng)殖;但目前也面臨眾多水產(chǎn)品共同面臨的問(wèn)題——易腐敗變質(zhì)。因此，人們開(kāi)發(fā)出了各種針對(duì)水產(chǎn)品品質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法，如感官評(píng)價(jià)、物理評(píng)價(jià)、化學(xué)評(píng)價(jià)、微生物評(píng)價(jià)等，而從水產(chǎn)品中蛋白質(zhì)的角度進(jìn)行相關(guān)研究的報(bào)道較少。
　　 近幾年來(lái)，蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展迅速，其中以雙向電泳技術(shù)(2-DE)、質(zhì)譜鑒定技術(shù)(MS)及其生物信息技術(shù)(Bioinformatics)為基礎(chǔ)的蛋白質(zhì)

2、組學(xué)技術(shù)為蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)，也為水產(chǎn)品品質(zhì)評(píng)價(jià)及形成機(jī)理的研究提供了新的思路。借助差異蛋白質(zhì)組學(xué)尋找、篩選并鑒定與中國(guó)對(duì)蝦新鮮度品質(zhì)相關(guān)的蛋白，再通過(guò)蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)及與該蛋白相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道進(jìn)行深入分析，探究中國(guó)對(duì)蝦品質(zhì)變化的生理生化基礎(chǔ)，能夠?yàn)榛诘鞍踪|(zhì)的中國(guó)對(duì)蝦品質(zhì)評(píng)價(jià)提供相關(guān)依據(jù)。
　　 本研究通過(guò)對(duì)影響中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白雙向電泳的相關(guān)技術(shù)參數(shù)進(jìn)行比較和優(yōu)化，建立了中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白的雙向電泳技術(shù)體系;并以從貯藏過(guò)程中

3、中國(guó)對(duì)蝦樣品中提取的低鹽溶性蛋白和從保鮮過(guò)程中（殼聚糖涂膜保鮮）中國(guó)對(duì)蝦樣品中提取的全肌肉蛋白為研究對(duì)象，對(duì)中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白變化進(jìn)行了差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究，主要的研究結(jié)果如下:
　　 1、中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白雙向電泳體系:在第一向(IEF)中，裂解液配方為8M尿素、2M硫脲、4％CHAPS、65mMDTT、0.67％Bio-Lyte，IPG膠條選擇pH4～7、長(zhǎng)度17cm，蛋白上樣體積為300μL、上樣量120μg，搭鹽橋，等電聚焦時(shí)

4、間80000v*h，主動(dòng)水化方式上樣;平衡時(shí)間13.5min;在第二向(SDS-PAGE)中，采用12.5％濃度膠進(jìn)行電泳;使用硝酸銀染色，并適當(dāng)控制顯色時(shí)間;最后對(duì)膠進(jìn)行掃描獲取凝膠圖譜，并用PDQuest軟件進(jìn)行分析。該體系能有效提高中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白質(zhì)的2-DE圖譜分辨率。
　　 2、通過(guò)SDS-PAGE技術(shù)研究中國(guó)對(duì)蝦不同溶解性肌肉蛋白質(zhì)的變化規(guī)律，發(fā)現(xiàn)中國(guó)對(duì)蝦的低鹽溶性蛋白貯藏過(guò)程中部分蛋白發(fā)生了較為明顯的變化，故應(yīng)用雙

5、向電泳技術(shù)對(duì)不同貯藏時(shí)間的中國(guó)對(duì)蝦低鹽溶性蛋白的2-DE圖譜進(jìn)行比較研究，從中篩選出8個(gè)差異較為顯著的蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)鑒定，鑒定出蛋白:NKG2D。該蛋白是與生物體免疫功能相關(guān)的受體，且該蛋白點(diǎn)是貯藏過(guò)程中蛋白豐度由多變少的顯著差異蛋白點(diǎn)。推測(cè)NKG2D受體蛋白是反映中國(guó)對(duì)蝦新鮮度品質(zhì)變化的相關(guān)蛋白之一。
　　 3、研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖涂膜保鮮對(duì)中國(guó)對(duì)蝦具有顯著保鮮效果，為研究殼聚糖保鮮對(duì)中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白質(zhì)的

6、影響，應(yīng)用雙向電泳技術(shù)對(duì)殼聚糖涂膜保鮮與對(duì)照組貯藏過(guò)程中中國(guó)對(duì)蝦肌肉全蛋白質(zhì)進(jìn)行了分析。從三類對(duì)比中尋找差異蛋白點(diǎn):同一冷藏時(shí)間保鮮組和對(duì)照組的樣品2-DE圖譜對(duì)比、保鮮組樣品不同冷藏時(shí)間的2-DE圖譜對(duì)比、對(duì)照組樣品不同冷藏時(shí)間的2-DE圖譜對(duì)比，從中篩選了8個(gè)具有統(tǒng)計(jì)意義(P＜0.05)的差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)測(cè)定，鑒定出蛋白:ATP-PRT（ATP phosphoribosyltransferase，ATP