青霉菌侵染哈密瓜前后超氧化物歧化酶(SOD)的克隆及表達(dá).pdf

1、哈密瓜是新疆的一種特色果蔬,在采摘后儲(chǔ)藏過(guò)程中容易腐爛變質(zhì),所以對(duì)其儲(chǔ)藏保鮮方面的研究一直是研究的熱點(diǎn)。超氧化物歧化酶(SOD)是一種可以清除自由基的廣泛存在的酶。目前研究發(fā)現(xiàn)與植物的保藏性,抗病性等密切相關(guān)。通過(guò)對(duì)哈密瓜SOD進(jìn)行研究為哈密瓜的貯藏保鮮提供新的思路和方向,具有重大的意義。
　　本研究主要是對(duì)新疆哈密瓜晚熟品種伽師瓜進(jìn)行研究,通過(guò)對(duì)其SOD酶的部分片段進(jìn)行克隆以及生物信息學(xué)分析,對(duì)哈密瓜致病青霉菌侵染前后的SOD酶

2、活性變化以及SOD酶的表達(dá)量變化做比較研究,得出SOD表達(dá)量與活性之間的關(guān)系,為后續(xù)SOD活性調(diào)控位點(diǎn),以及SOD的抗病機(jī)制的研究做鋪墊。
　　(1)哈密瓜Cu/Zn-SOD基因部分序列的克隆及分析
　　采用PCR技術(shù),克隆出Cu/Zn-SOD基因cDNA部分序列,命名為HmCu/ZnSOD,提交 Genebank,獲得登錄號(hào)為KF671956。
　　HmCu/ZnSOD cDNA序列長(zhǎng)403bp,編碼133個(gè)氨基酸,

3、氨基酸序列分子量為13649.0kDa,等電點(diǎn)PI值是5.24;進(jìn)化樹分析顯示哈密瓜的Cu/Zn-SOD與同屬葫蘆科的黃瓜和西瓜屬同一進(jìn)化分支;氨基酸序列同源性比較得出與其他植物的Cu/Zn-SOD基因高度同源,該基因的亞細(xì)胞定位點(diǎn)是細(xì)胞質(zhì),沒(méi)有跨膜區(qū)域,為細(xì)胞內(nèi)親水性非分泌蛋白。
　　(2)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)方法對(duì)接菌不同時(shí)間哈密瓜Cu/Zn-SOD基因轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行研究
　　

4、在同一哈密瓜接菌部分,其在24小時(shí)和72小時(shí)的表達(dá)量會(huì)提高,其中在24小時(shí)達(dá)到最高;不接菌部分,其表達(dá)量在24小時(shí)增長(zhǎng),在48小時(shí)、72小時(shí)又下降在96小時(shí)又增長(zhǎng),其變化趨勢(shì)滯后于接菌;在正常未接菌的哈密瓜上,SOD隨著時(shí)間的延長(zhǎng)基因表達(dá)變化幅度在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)都普遍低于哈密瓜接菌,且總體趨勢(shì)緩慢增長(zhǎng)。
　　(3)對(duì)接菌哈密瓜與不接菌哈密瓜在儲(chǔ)藏過(guò)程中的SOD酶變化進(jìn)行測(cè)定
　　采用NBT光還原法對(duì)哈密瓜SOD接菌與不接菌時(shí)不同