新型樣品前處理技術(shù)在藥物制劑復(fù)雜基質(zhì)中的研究與應(yīng)用.pdf

1、制備安全、有效、穩(wěn)定、使用方便的藥物制劑，一直以來(lái)是人們追尋的目標(biāo)。當(dāng)代的藥物的制劑種類繁多，組分復(fù)雜，如何評(píng)價(jià)藥品的質(zhì)量?jī)?yōu)劣，離不開(kāi)具有高分離效能的分析方法作為“眼睛”加以判斷。
　　藥物的制劑除含有活性成分外，還含有多種附加劑，附加劑的出現(xiàn)有時(shí)會(huì)影響待測(cè)組分的測(cè)定。待分析組分往往存在于復(fù)雜的藥物輔料基質(zhì)中，尤其是當(dāng)基質(zhì)中含有大分子物質(zhì)時(shí)。這些共存組分及大分子物質(zhì)的存在通常會(huì)導(dǎo)致分析方法的耐受性降低，甚至?xí)绊懛椒ǖ臏?zhǔn)確性及精密

2、度，這就需要建立一種有效的分析樣品前處理方法。在最大限度消除共存基質(zhì)干擾的同時(shí)，進(jìn)一步地提高分析靈敏度，以更好地保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，表征藥物制劑質(zhì)量。
　　傳統(tǒng)制劑，如片劑、顆粒劑、注射劑等，其基質(zhì)組成比較簡(jiǎn)單，干擾成分較少，常用的提取分離技術(shù)，如溶劑萃取、超聲萃取、蛋白沉淀等，即可實(shí)現(xiàn)待測(cè)組分與基質(zhì)的分離。然而，對(duì)于基質(zhì)成分較為復(fù)雜的現(xiàn)代制劑，如脂質(zhì)體，磷脂雙分子層膜的使用，提高了藥物的可控釋放性以及在體內(nèi)的靶向給藥，但是，膜

3、的非穩(wěn)定性在一定程度上加大了準(zhǔn)確表征其質(zhì)量的難度。如何在最大限度維持脂質(zhì)體原始穩(wěn)定狀態(tài)下，有效地分離未包封藥物，準(zhǔn)確表征脂質(zhì)體質(zhì)量，一直是分析工作者面臨的難題。包封率是表征藥物脂質(zhì)體質(zhì)量的重要指標(biāo)。用于脂溶性藥物脂質(zhì)體分離時(shí)，由于未包封藥物不溶于水，在水相中容易形成微顆?；蚍肿泳奂癄顟B(tài)，可能會(huì)影響包封率的測(cè)定準(zhǔn)確性。課題系統(tǒng)性研究了4種樣品前處理方法(SEC、SPE、CF-UF、HF-CF-UF)進(jìn)行脂溶性藥物脂質(zhì)體包封率表征的特征。比

4、較了四種方法在表征脂溶性藥物脂質(zhì)體方面各自的局限性，為正確選擇脂溶性藥物脂質(zhì)體包封率測(cè)定方法提供了依據(jù)。
　　藥物的質(zhì)量不僅要保證藥效學(xué)成分質(zhì)與量，毒性成分的表征也是藥物質(zhì)量的重要參數(shù)，其是保障藥物安全性的重大問(wèn)題。中成藥是由多味藥材或藥材提取物制得，通常其顏色較重，氣味濃烈，化學(xué)成分極其復(fù)雜;其制造、貯存及流通過(guò)程中，易發(fā)生霉變，產(chǎn)生對(duì)人體有害的真菌毒素，其中黃曲霉毒素對(duì)人體的毒性不容忽視。
　　課題研究了在中成藥復(fù)雜的化

5、學(xué)成分中分離純化黃曲霉毒素的樣品前處理技術(shù)，建立了一個(gè)新穎的多級(jí)復(fù)合前處理技術(shù)，力爭(zhēng)除去中成藥中不同基源的雜質(zhì)干擾，使中成藥中的AFB1、AFB2、AFG1、AFG2得到了有效的純化富集;以小兒清熱止咳口服液為代表，評(píng)估了所建立中成藥樣品前處理效率。結(jié)果表明該法簡(jiǎn)單、快速、成本低廉且方法重現(xiàn)性較好、能有效地凈化基質(zhì)，為現(xiàn)代中成藥中痕量AF的純化富集及檢測(cè)提供了一個(gè)可借鑒的手段。
　　第一部分脂溶性藥物脂質(zhì)體質(zhì)量表征的理論性研究

6、r>　　目的:系統(tǒng)性研究凝膠色譜法(SEC)、固相萃取法(SPE)、離心超濾法(CF-UF)及中空纖維離心超濾法(HF-CF-UF)進(jìn)行脂溶性藥物脂質(zhì)體包封率表征的特性，為正確選擇脂溶性成分脂質(zhì)體包封率測(cè)定方法提供依據(jù)。
　　方法:以兩性霉素B脂質(zhì)體為代表。采用SEC法、SPE法、CF-UF法及HF-CF-UF法分析測(cè)定了包封率;分析了4種樣品前處理方法包封率測(cè)定結(jié)果的差異;采用模擬拆方的方法，研究了SPE法產(chǎn)生結(jié)果不確定性的成因

7、，并進(jìn)一步通過(guò)實(shí)驗(yàn)究其原因;在CF-UF法及HF-CF-UF法中，均通過(guò)比較不同濃度對(duì)照溶液的回收率，分析了包封率測(cè)定結(jié)果出現(xiàn)偏差的原因。實(shí)驗(yàn)采用Diamonsil C18柱(2504.6 mm，5μm);流動(dòng)相為乙腈-0.02mol·L-1乙二胺四乙酸二鈉(38∶62，v/v);流速為1.0 mL·min-1，在405 nm處進(jìn)行AmB檢測(cè)。
　　結(jié)果:SEC法測(cè)定的包封率為93％左右;SPE法測(cè)定結(jié)果僅為6～13％，主要是由于

8、固定相填料C18及HLB對(duì)脂質(zhì)體中的穩(wěn)定劑具有較強(qiáng)的吸附作用;CF-UF法中未檢測(cè)到游離藥物，超濾前后樣品管內(nèi)溶液濃度幾乎不變，而隨著對(duì)照品濃度的增加，超濾管內(nèi)溶液回收率降低，說(shuō)明存在濃差極化現(xiàn)象;HF-CF-UF法包封率測(cè)定結(jié)果為99％，藥物在0.67～21.4μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)，回收率均大于97％;當(dāng)大于25.0μg· mL-1時(shí)，回收率降低至85％左右。脂溶性藥物微晶顆粒或分子聚集體的存在是回收率驟降的原因。
　　結(jié)

9、論:HF-CF-UF法能夠在不破壞脂質(zhì)體原始穩(wěn)定的存在環(huán)境下，實(shí)現(xiàn)了大分子脂質(zhì)體與未包封藥物的有效分離，更適合于游離濃度較低的脂溶性藥物脂質(zhì)體的包封率的測(cè)定;對(duì)于SEC法，在保證SEC柱能夠準(zhǔn)確分離未包封藥物的前提下，更適用于水溶性藥物脂質(zhì)體包封率的分析;SPE(C18及HLB)法不適用于以去氧膽酸鈉和膽固醇為穩(wěn)定劑的脂質(zhì)體的包封率測(cè)定;CF-UF法不適合于分析脂溶性藥物脂質(zhì)體的包封率。
　　第二部分新型多級(jí)復(fù)合前處理方法用于中成

10、藥中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的測(cè)定
　　目的:建立了一個(gè)新型的多級(jí)復(fù)合前處理技術(shù)，力爭(zhēng)除去中成藥中不同基源的雜質(zhì)干擾，使中成藥中的AFB1、AFB2、AFG1、AFG2得到了有效的純化富集，為現(xiàn)代中成藥中痕量AF的純化富集及檢測(cè)提供了一個(gè)可借鑒的手段。
　　方法:樣品前處理方法的研究:(1)純化過(guò)程考察了提取比例和提取時(shí)間，脫水劑種類和加入量以及吸附劑種類和加入量對(duì)純化效率的影響。(2)萃取過(guò)程以黃曲霉毒素G1為代表

11、，以甲醇濃度、萃取時(shí)間及氧化石墨烯的加入量3個(gè)因素為自變量，黃曲霉毒素的峰面積為因變量，采用BBD設(shè)計(jì)3因素3水平共17個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的響應(yīng)曲面分析實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行線性回歸和二次項(xiàng)擬合，優(yōu)化萃取條件。同時(shí)還考察了氯化鈉的加入量對(duì)于萃取效率的影響。檢測(cè)手段:采用phenomenexc(R)C18柱(2504.60 mm，5μm)進(jìn)行分離，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-磷酸溶液(pH=3.5)(3∶3∶5，v/v)，以0.8mL·min-1的流速，進(jìn)入到柱后衍生

12、系統(tǒng)。衍生溶液為0.05％碘溶液（取碘0.5 g，加入甲醇100 mL使溶解，用水稀釋定容至1000mL，即得），流速為0.3 mL·min-1，衍生反應(yīng)溫度70℃。熒光檢測(cè):激發(fā)波長(zhǎng)為360 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為450 nm。方法學(xué)考察:分別進(jìn)行了線性、準(zhǔn)確度、精密度、LOD及LOQ考察。
　　結(jié)果:純化過(guò)程的最優(yōu)條件為:甲醇-樣品溶液的最優(yōu)提取比例為9∶1，水浴超聲提取10 min，脫水劑為無(wú)水硫酸鎂，最優(yōu)加入量為1.0 g，吸附

13、劑為中性氧化鋁，最優(yōu)加入量為0.5 g。萃取過(guò)程:甲醇濃度:12.5％，萃取時(shí)間:15 min，氧化石墨烯的加入量3.0 mg。AFB1、AFB2、AFG1和AFG2分別在0.125～2.50 ng·mL-1、0.0625～0.625 ng·mL-1、0.125～2.50ng·mL-1、0.0625～0.625 ng·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回收率大于83.0％，RSD小于3.7％。AFB1、AFB2、AFG1和AFG2的最低檢測(cè)限