復(fù)雜樣品中藥物檢測(cè)前處理方法的研究與應(yīng)用.pdf

1、隨著生活水平的提高,食品安全和人體健康問(wèn)題越來(lái)越引起人們的關(guān)注,各類藥物的檢測(cè)問(wèn)題也頗受人們的關(guān)注,復(fù)雜基體中藥物殘留的檢測(cè)主要分為前處理和檢測(cè)兩部分,隨著科技進(jìn)步,儀器的靈敏度、選擇性和精密度已經(jīng)能夠滿足一般樣品測(cè)定的要求。對(duì)于基質(zhì)比較復(fù)雜的樣品,制約其農(nóng)殘檢測(cè)的關(guān)鍵問(wèn)題是樣品前處理。本文對(duì)現(xiàn)有的前處理技術(shù)進(jìn)行綜述,并利用熒光猝滅法研究藥物分子與樣品基質(zhì)的相互結(jié)合作用,闡明藥物在水產(chǎn)品樣品基質(zhì)中的存在狀態(tài),為藥物殘留的提取提供理論依據(jù)

2、,并結(jié)合乙腈-無(wú)機(jī)鹽-水雙水相基質(zhì)去除法和改進(jìn)QuEChERS法與氣相色譜檢測(cè)技術(shù)建立了檢測(cè)魚(yú)肉樣品中擬除蟲(chóng)菊酯的方法、結(jié)合分子印跡技術(shù)與化學(xué)發(fā)光法建立了檢測(cè)尿液中苯乙雙胍的方法、結(jié)合平衡透析法與化學(xué)發(fā)光法研究了苯乙雙胍和蛋白質(zhì)的結(jié)合作用。
　　論文主要分為五部分:
　　第一部分:對(duì)復(fù)雜樣品的前處理方法進(jìn)行綜述,并闡明了課題的研究?jī)?nèi)容和意義。
　　第二部分:基于乙腈-無(wú)機(jī)鹽-水雙水相基質(zhì)去除樣品前處理和氣相色譜法建立了

3、一種環(huán)境友好型檢測(cè)魚(yú)肉樣品中擬除蟲(chóng)菊酯的方法。實(shí)驗(yàn)利用熒光猝滅法與氣相色譜法法研究了擬除蟲(chóng)菊酯藥物在以蛋白質(zhì)為主要基質(zhì)的水產(chǎn)品中的存在狀態(tài),考查了雙水相的形成條件,并探討了蛋白質(zhì)對(duì)雙水相萃取率的影響。結(jié)果表明擬除蟲(chóng)菊酯藥物通過(guò)疏水作用力與蛋白質(zhì)牢固結(jié)合。體積分?jǐn)?shù)為80％的乙腈水溶液作為萃取液可以引起水產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)基質(zhì)緩慢而徹底的變性,充分釋放與蛋白質(zhì)結(jié)合的藥物,然后再加入K2HPO4鹽形成雙水相體系,藥物殘留進(jìn)入雙水相上相實(shí)現(xiàn)擬除蟲(chóng)菊

4、酯的均相高效萃取。80%的乙腈水溶液具有較強(qiáng)化學(xué)極性,與藥物殘留共同進(jìn)入上相的脂溶性雜質(zhì)較少,萃取液凈化步驟大大簡(jiǎn)化。在雙水相上相中加入無(wú)水MgSO4、PSA去除水分與雜質(zhì)后直接進(jìn)樣進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)。該方法用于魚(yú)肉樣品中六種擬除蟲(chóng)菊酯的萃取檢測(cè),回收率為81.1~96.4%,檢出限為8~14ng·mL-1。
　　第三部分:本文利用改進(jìn)QuEChERS法結(jié)合氣相色譜檢測(cè)技術(shù),提出一種新的檢測(cè)魚(yú)肉中六種擬除蟲(chóng)菊酯的方法。最初QuECh

5、ERS方法只采用乙腈作為提取劑,本文用異丙醇代替乙腈來(lái)改進(jìn)QuEChERS方法。結(jié)果表明,對(duì)于蛋白基質(zhì)樣品中的擬除蟲(chóng)菊酯,選用異丙醇為提取劑的改進(jìn)QuEChERS方法,其提取率(75.8~89.4%)高于傳統(tǒng)QuEChERS方法中的乙腈提取率(68.9~84.8%)。運(yùn)用熒光猝滅法研究了擬除蟲(chóng)菊酯與BSA的結(jié)合作用,結(jié)果表明,擬除蟲(chóng)菊酯與BSA有較強(qiáng)的結(jié)合作用,這種結(jié)合作用會(huì)降低以對(duì)蛋白為基質(zhì)的樣品中擬除蟲(chóng)菊酯的提取率。本文以體積分?jǐn)?shù)為

6、80%的異丙醇為提取劑,在此環(huán)境下,魚(yú)肉中的蛋白質(zhì)會(huì)發(fā)生緩慢且完全的變性,釋放與其結(jié)合的擬除蟲(chóng)菊酯藥物,進(jìn)而得到較高的提取率。本方法用于檢測(cè)魚(yú)肉中的6中擬除蟲(chóng)菊酯得到滿意結(jié)果。本論文提出一種通過(guò)減慢蛋白質(zhì)變性速度使其釋放與其結(jié)合藥物,進(jìn)而提高以魚(yú)肉中擬除蟲(chóng)菊酯提取率的新方法。
　　第四部分:以α-甲基丙烯酸(MAA)為功能單體,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)為交聯(lián)劑,偶氮二異丁腈(AIBN)為引發(fā)劑,合成鹽酸苯乙雙胍分子印跡聚

7、合物,并制備了在線富集發(fā)光流通柱,利用N-溴代丁二酰亞胺(NBS)-曙紅Y(EY)-鹽酸苯乙雙胍化學(xué)發(fā)光體系,結(jié)合流動(dòng)注射分析技術(shù),建立了高選擇性、高靈敏測(cè)定鹽酸苯乙雙胍的分子印跡化學(xué)發(fā)光分析法。該方法線性范圍為0.09~2.0μg·mL-1,線性相關(guān)系數(shù)為0.9920,檢出限為0.031μg·mL-1,對(duì)1.0×10-6g·mL-1鹽酸苯乙雙胍溶液平行測(cè)定11次的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為,1.0%。該方法已用于尿液中鹽酸苯乙雙胍的測(cè)定。

8、　　第五部分:利用化學(xué)發(fā)光法結(jié)合平衡透析技術(shù),研究了鹽酸苯乙雙胍藥物和牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。利用NBS-曙紅Y化學(xué)發(fā)光體系建立了新的檢測(cè)鹽酸苯乙雙胍的方法,研究了其發(fā)光機(jī)理,并對(duì)化學(xué)發(fā)光條件進(jìn)行了優(yōu)化。在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下,化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度與苯乙雙胍濃度在4.6×10-8~5.0×10-5g·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系,計(jì)算其檢出限為1.5×10-8g·mL-1。利用Klotz plot和Scatchard分析法對(duì)化學(xué)發(fā)光-平衡透