食品中空腸彎曲桿菌風(fēng)險(xiǎn)識別及菌株特性研究.pdf

1、空腸彎曲桿菌（Campylobcter jejuni）是引起人腸道感染的主要代表菌之一，它除引起腸炎腹瀉外，還易造成食物中毒，并伴發(fā)關(guān)節(jié)炎肝炎格林-巴利綜合癥等免疫損傷性疾病。其生存條件嚴(yán)苛卻易導(dǎo)致人和動(dòng)物致病。由于目前對全中國各省市零售食品中的污染狀況不夠清晰，于是本課題開展全國性空腸彎曲菌的分布規(guī)律探索，以從宏觀上把握污染規(guī)律，同時(shí)從微觀上探索菌株特性，為減少空腸彎曲桿菌導(dǎo)致的食品安全問題提供有效的理論依據(jù)。
　　1.本研究從

2、2013年7月至2014年6月進(jìn)行了全國范圍內(nèi)主要城市的零售食品的空腸彎曲桿菌的污染調(diào)查研究，檢測七大類零售食品樣本共1798份，檢出陽性樣本59份，平均污染率3.30％(59/1798)。其中陽性樣本主要是來自禽畜肉類，且呈現(xiàn)南方污染率高于北方的趨勢。根據(jù)生化反應(yīng)和針對基因hipO和16S rRNA基因多重PCR分子鑒定，得到菌株34株。
　　2.空腸彎曲桿菌是苛性營養(yǎng)的微需氧細(xì)菌，它不易培養(yǎng)和保藏，本文在研究開始前對菌種的保藏

3、條件進(jìn)行了探索，選用不同的保藏液與保藏溫度進(jìn)行為期18個(gè)月的保藏實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)選用含0.025％的FBP(丙酮酸鈉、硫酸亞鐵和偏重亞硫酸鈉三者的混合)的布氏肉湯加20％的甘油保藏效果最好，其次是80％的脫纖維綿羊血和20％的甘油保藏。-80℃的超低溫冰箱的保藏效果最好，至少可保藏一年半以上。
　　3.對調(diào)查分離的菌株進(jìn)行遺傳多樣性研究，包括空腸彎曲桿菌的耐藥性實(shí)驗(yàn)和耐藥基因突變研究、針對鞭毛基因的限制酶長片段多態(tài)性(flaA PCR-

4、RFLP)分型研究以及菌株攜帶11種常見的毒理基因研究。研究發(fā)現(xiàn)，菌株多重耐藥性很強(qiáng)，有20株菌耐受5-8種抗生素，有2株菌可同時(shí)耐受9種抗生素，另外喹諾酮類抗生素的耐藥率達(dá)到88.5％。運(yùn)用MAMA-PCR檢測耐喹諾酮類基因突變結(jié)果顯示，有30株菌株在喹諾酮類耐受性決定區(qū)gyra基因的第257位堿基C突變?yōu)門，致第86位蘇氨酸變?yōu)楫惲涟彼?，對喹諾酮的耐受性大大增強(qiáng)。MAMA-PCR結(jié)果與藥敏實(shí)驗(yàn)相符合。對于空腸彎曲桿菌的flaA PC

5、R-RFLP分型結(jié)果，運(yùn)用聚類軟件分析顯示在相對相似系數(shù)0.81時(shí)，可將菌株分成21個(gè)型別，顯示出菌株之間的差異性較大。另外，通過運(yùn)用PCR檢測與粘附、定植以及侵襲相關(guān)的11種毒理基因發(fā)現(xiàn)，菌株之間攜帶毒理基因的差別不大，基本都攜帶粘附和定植相關(guān)基因，攜帶率均在60％以上，但是與侵襲相關(guān)基因cjaB，pldA，imaA三者在分離菌株中的攜帶率均在10％以下。
　　4.對空腸彎曲桿菌的生物膜的形成和控制進(jìn)行探索，發(fā)現(xiàn)空腸彎曲桿菌單獨(dú)

6、形成生物膜的能力很弱，在大氣的狀態(tài)下培養(yǎng)生物膜形成量多于微需氧條件下，實(shí)驗(yàn)中讓其分別與大腸桿菌和銅綠假單胞菌共生培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)生物膜的形成量遠(yuǎn)高于單獨(dú)生長的生物膜量。實(shí)驗(yàn)還摸索了運(yùn)用不同濃度納米氧化鋅處理后的生物膜形成狀況，通過用結(jié)晶紫染色法半定量并運(yùn)用掃描電鏡和激光共聚焦實(shí)驗(yàn)檢測發(fā)現(xiàn)納米氧化鋅的濃度在0.5mg/ml的狀況下對空腸彎曲桿菌的生物膜形成有較好的抑制效果。
　　本研究進(jìn)行的空腸彎曲桿菌污染規(guī)律探索及菌株特性研究，為評估空