儲(chǔ)煙倉(cāng)庫(kù)中蘇云金芽孢桿菌資源及新菌株LY-99的特性研究.pdf

1、儲(chǔ)煙倉(cāng)庫(kù)環(huán)境富含蘇云金芽孢桿菌，且組成上不同于土壤環(huán)境，蘇云金芽孢桿菌的檢出率較高，是許多特異性蘇云金芽孢桿菌資源的積聚場(chǎng)所。目前，國(guó)內(nèi)外有關(guān)在儲(chǔ)煙倉(cāng)庫(kù)中分離蘇云金芽孢桿菌菌株的研究較少。本文以全國(guó)6個(gè)不同省份的8個(gè)主要卷煙廠為代表，考察了我國(guó)儲(chǔ)煙倉(cāng)庫(kù)中蘇云金芽孢桿菌資源分布情況，并對(duì)所分離到的蘇云金芽孢桿菌新菌株LY-99進(jìn)行了分子特性研究。 1．儲(chǔ)煙倉(cāng)庫(kù)中蘇云金芽孢桿菌的分離和篩選 本文通過(guò)醋酸鈉抑制篩選法對(duì)采集于全

2、國(guó)8個(gè)主要卷煙廠（襄樊卷煙廠、武漢卷煙廠、龍巖卷煙廠、廈門(mén)卷煙廠，延吉卷煙廠、杭州卷煙廠、昆明卷煙廠和廣州卷煙廠）儲(chǔ)煙倉(cāng)庫(kù)中的578份不同類(lèi)型的樣品進(jìn)行了蘇云金芽孢桿菌的分離和篩選。結(jié)果表明，煙葉儲(chǔ)藏倉(cāng)庫(kù)中蘇云金芽孢桿菌資源極為豐富，在其中的238份樣品中分離出蘇云金芽孢桿菌972株，檢出率高達(dá)41.18％；不同卷煙廠中蘇云金芽孢桿菌的檢出率不同，延吉卷煙廠的檢出率最高（100％），其次是龍巖卷煙廠（96.15％）、昆明卷煙廠（79.3

3、7％）、襄樊卷煙廠（78.95％）、廈門(mén)卷煙廠（61.11％）、杭州卷煙廠（29％）、廣州卷煙廠（22.81％）和武漢卷煙廠（15.27％）。不同類(lèi)型的樣品的檢出率和所分離出的菌株數(shù)也存在較大的差別，其中粉塵樣品所含蘇云金芽孢桿菌資源最為豐富，依次是煙葉碎屑、煙葉和死蟲(chóng)。 2．新菌株LY-99的分子特性研究 初步考察了儲(chǔ)煙倉(cāng)庫(kù)中蘇云金芽孢桿菌分離株對(duì)鱗翅目昆蟲(chóng)小菜蛾、甜菜夜蛾、煙草粉螟以及雙翅目昆蟲(chóng)韭蛆的生物活性。初步明

4、確了儲(chǔ)煙倉(cāng)庫(kù)中蘇云金芽孢桿菌對(duì)供試?yán)ハx(chóng)的活性差異，并篩選出對(duì)小菜蛾、甜菜夜蛾及煙草粉螟具有較高生物活性，同時(shí)對(duì)雙翅目害蟲(chóng)韭蛆也有一定的生物活性的分離株LY-99，為今后商品化開(kāi)發(fā)提供了基礎(chǔ)。菌株LY-99的遺傳多樣性分析結(jié)果表明，分離于煙葉儲(chǔ)藏倉(cāng)庫(kù)中的LY-99是一株新的阿萊亞種菌株（alesti，H3a3c）。以阿萊亞種標(biāo)準(zhǔn)菌株作為對(duì)照，進(jìn)行質(zhì)粒圖譜分析、SDS-PAGE分析、基因型鑒定、PCR-RFLP分析、序列分析以及生物活性測(cè)定

5、等。結(jié)果表明分離株LY-99雖然和對(duì)照菌株具有相同的血清型，但兩者的質(zhì)粒圖譜分析、SDS-PAGE分析卻不相同；基因型鑒定結(jié)果顯示菌株LY-99含有豐富的cry1類(lèi)基因，同時(shí)還含有一個(gè)cry2基因，而標(biāo)準(zhǔn)菌株只含有一個(gè)cryAe基因；PCR-RFLP分析結(jié)果表明菌株LY-99含有一個(gè)新的cry1類(lèi)基因，而序列分析表明該基因?yàn)橐粋€(gè)新的cryLA類(lèi)基因，已經(jīng)被蘇云金芽孢桿菌殺蟲(chóng)晶體蛋白基因命名委員會(huì)命名為crylAh2（基因編號(hào)：DQ269