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文檔簡介
1、福建農林大學碩士學位論文蘇云金芽孢桿菌010菌株chi36基因克隆、表達和活性測定姓名:謝宇飛申請學位級別:碩士專業(yè):農藥學指導教師:黃志鵬20100401禍建農林大學碩學位論文CloningEx[andCCloningxpresslonanclharacterizationofnaraCterlZatlon0tthechi36genefromBacillusthuringiensis010Abstractchi36wasamplifi
2、edbyPCRfromtotalDNAofBacillusthuringiensis010astemplatesPCRproductWaspurified,clonedintopMD18一TandsequencedItincludedanopenreadingframeof1083bp,encodingaproteinof360residueswithacalculatedmolecularweightof390kDaandapredi
3、ctedpIvalueof652BLASTcomparisonsshowedthatthenucleotidesequenceofBt010chi36had97%,99%,99%,93%homologywithBt15A3,BeCH,Be28—9,Be6ElrespectivelyScanPrositeanalysisrevealedthatChi36belongtofamily18ofglycosylhydrolases,classi
4、fiedasanexochitinase,andonlycontainedcatalyticdomain,withoutFLDsandCBD。TherecombinantexpressionplasmidpGEX—chi36Wasconstructedbyinsertionofchi36geneintotheexpressionvectorpGEXKG,andthenWastransformedintoEcoliBL21(DE3)toe
5、xpresstheChi36undertheinductionof10mmol/LIPTGSDS—PAGEshowedthatthemolecularweightoftheexpressedfusionproteinWasabout65kDaincluding26kDaGSTcarrierproteinBioactivityassayindicatedthattheexpressedfusionproteinextractedfromt
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