通過環(huán)介導恒溫擴增技術(shù)快速檢測空腸彎曲桿菌和幽門螺桿菌.pdf

1、目的：
　　建立一種基于DNA環(huán)介導恒溫核酸擴增技術(shù)(LAMP)快速檢測空腸彎曲桿菌和幽門螺桿菌的方法，并對該方法檢測兩種細菌的特異性及敏感性加以驗證。
　　方法：
　　1.以空腸彎曲桿菌馬尿酸酶基因(HipO基因)、幽門螺桿菌尿素酶B基因(UreB基因)為靶序列分別設計特異性引物5-6套;
　　2.通過比較各引物的擴增效率分別篩選出針對空腸彎曲桿菌和幽門螺桿菌擴增效率較高的引物組合;
　　3.以其他菌株和

2、ddH2O作為對照，對備選引物按照擴增效率高低逐一進行特異性檢驗，直至2種細菌各選出1套擴增效率高且特異性好的最佳引物組合;
　　4.分別篩選出兩種細菌LAMP反應的最佳反應溫度;
　　5.將細菌DNA模板原液用ddH2O進行10倍梯度稀釋，判定LAMP法檢測空腸彎曲桿菌、幽門螺桿菌的敏感性。
　　6.用LAMP法分別檢測50例腹瀉患者糞便樣本中的空腸彎曲桿菌和80例胃液樣本中的幽門螺桿菌，對LAMP法檢測兩種細菌陽性

3、率、靈敏度、特異度與其他常用方法進行比較。
　　結(jié)果：
　　1.空腸彎曲桿菌LAMP反應最佳引物組合為CJ-5，幽門螺桿菌LAMP反應最佳引物組合為HPUB-3，反應均在60min內(nèi)完成;
　　2.LAMP法的特異性檢測結(jié)果顯示，實驗中選取的兩組特異性引物能分別使空腸彎曲桿菌和幽門螺桿菌發(fā)生擴增反應，而不能使其他菌株和ddH2O發(fā)生擴增反應;
　　3.LAMP法的敏感性檢測結(jié)果顯示，空腸彎曲桿菌的最低檢出限為6.

4、97×102拷貝/μl，幽門螺桿菌的最低檢出限為2.61×103拷貝/μl;
　　4.應用LAMP法對50例腹瀉患者糞便樣本進行檢測，未發(fā)現(xiàn)空腸彎曲桿菌，與PCR法結(jié)果一致;應用LAMP法對80例胃液樣本中幽門螺桿菌進行檢測，其陽性檢出率為41.25％，靈敏度為94.3％，特異度為95.7％，與PCR法、病理組織學檢查及13C呼氣試驗結(jié)果無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.本研究以HipO基因、UreB