一種基于整合素ανβ3為靶點(diǎn)的微泡造影劑的制備及體內(nèi)外效能評價.pdf

1、1968年， Gramiak首次采用超聲心動圖檢查心臟內(nèi)注射吲哚青藍(lán)染料，并提出超聲微泡造影劑的應(yīng)用。國內(nèi)外許多學(xué)者進(jìn)一步對超聲微泡造影劑的應(yīng)用展開深入研究。當(dāng)前，靶向超聲微泡造影劑是超聲研究和其它醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。越來越多的研究人員發(fā)現(xiàn)，靶向微泡造影劑能夠從分子水平上識別、特異性靶向病變組織，在病變組織部位的靶向位點(diǎn)產(chǎn)生特異性超聲顯影，從而明顯提高對早期疾病病變的超聲診斷能力。
　　鑒于腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)整合素ανβ3

2、受體，高表達(dá)的整合素ανβ3受體是一種具有潛在臨床應(yīng)用價值的腫瘤靶向受體。因此，通過制備一種以整合素ανβ3為靶點(diǎn)的超聲微泡造影劑，可以直接實(shí)現(xiàn)腫瘤新生血管的增強(qiáng)顯影。本課題擬通過共價連接的方法將 iR G D肽中的巰基和磷脂材料DSPE-PEG2000 Maleimides上的馬來酰亞胺基團(tuán)共價連接，制備一種基于整合素ανβ3受體的靶向超聲微泡造影劑。體外觀察其與小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞（ bEe nd.3）的黏附能力，并進(jìn)一步在小鼠乳腺癌4

3、T1模型上觀察其對腫瘤新生血管內(nèi)皮特異性增強(qiáng)超聲分子顯影和靶向效應(yīng)，有望作為超聲分子探針檢測評價整合素ανβ3在腫瘤血管新生中表達(dá)，為腫瘤早期診斷和治療尋找新的靶點(diǎn)。
　　1.通過制備一種新的靶向腫瘤新生血管整合素ανβ3受體的超聲微泡造影劑，應(yīng)用粒徑分析儀、光學(xué)顯微鏡及超聲成像儀進(jìn)行表征或檢測。通過“巰基-馬來酰亞胺”化學(xué)偶聯(lián)法將 iRGD偶聯(lián)到磷脂材料 DSPE-PEG2000 Maleimide上，MS對其合成產(chǎn)物 DSPE

4、-PEG2000-iRGD進(jìn)行鑒定。通過G-250蛋白含量測定方法，檢測微泡表面 iRGD肽含量及分子數(shù)。結(jié)果顯示：DSP E-PEG2000-iRGD與 iRGD靶向微泡造影劑上鑒定出含有 iRGD肽。iRGD靶向超聲微泡造影劑（ iRGD-MBs）在平均粒徑、粒徑大小分布、濃度、體外超聲造影以及光學(xué)形態(tài)上與普通超聲微泡造影劑（Control MBs）基本相似。當(dāng)DSPC，DSPE-PEG2000，DSPE-PEG-iRGD摩爾比9:

5、0.5:0.5時，一定量的微泡表面 iR G D肽含量最高，符合理想造影劑的要求。
　　2.通過探討 iRGD-MBs體外特異性靶向血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附效果和能力。體外靜態(tài)黏附實(shí)驗(yàn)顯示，iRGD-MBs可以較多并牢固地結(jié)合與 bEnd.3細(xì)胞表面；加入抗整合素ανβ3受體的單克隆抗體封閉后，該結(jié)合可以被競爭性阻斷。加入 Control MBs未觀察到與bEnd.3細(xì)胞結(jié)合。平行板流動腔體外結(jié)果顯示，在血流剪切力1 dyne/cm2條

6、件下，iRGD-MBs可與培養(yǎng)皿上的 bEnd.3細(xì)胞靶向結(jié)合，而抗體封閉組及 Control MBs對照組均未見明顯微泡結(jié)合。
　　3.通過探討制備出的靶向血管內(nèi)皮整合素ανβ3受體的超聲微泡造影劑結(jié)合超聲分子成像技術(shù)在體內(nèi)實(shí)時、無創(chuàng)性評估小鼠4T1腫瘤新生血管的超聲分子成像情況。結(jié)果顯示：在iRGD-MBs造影組中，腫瘤組織的VI值與Control MBs造影組腫瘤組織的VI值相比較（10.70±2.75、1.13±0.18，

7、P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P<0.05）。iRGD-MBs超聲視頻信號強(qiáng)度值約為 Control MBs組的10倍。HE切片染色顯示，腫瘤組織形態(tài)較好，可見紅細(xì)胞分布于腫瘤血管內(nèi)。腫瘤組織免疫熒光顯示，4T1腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞 CD31和整合素ανβ3受體陽性表達(dá)， CD31紅色著色，整合素ανβ3受體綠色著色。iRGD-MBs組較 Control MBs組有明顯的靶向腫瘤新生血管，有望成為一種理想的腫瘤新生血管內(nèi)超聲分子探