大鼠急性心肌梗死后心肌組織KCNE1和KCNE2表達變化及比索洛爾對其影響.pdf

1、背景：
　　 急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是心血管病急癥,在冠心病中是極其嚴重的臨床類型,近些年統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示發(fā)病率呈逐漸上升趨勢。急性心肌梗死后惡性心律失常是心血管系統(tǒng)中最危重的急性事件,特別是單純性和＼或多形性室性心動過速、心室顫動等快速性心律失常,不但可以加重原有的心血管疾病,往往也是誘發(fā)心源性休克和猝死的原因之一。臨床工作中針對心律失常藥物保守治療的療效并不十分顯著,總有效

2、率約40％～70%。目前人們對心律失常的形成機制尚不完全清楚。因此,深入探討心律失常發(fā)生機制,尋找藥物新的作用靶點是抗心律失常研究領域的重點和難點。近些年人們研究發(fā)現(xiàn),急性心肌梗死后梗死區(qū)和梗死周邊存活心肌,心肌細胞膜離子通道的異常電重構(gòu),在急性缺血性心肌心律失常發(fā)生上起關鍵作用;可能是心律失常形成和發(fā)展的重要機制。KCNE基因家族編碼的含有N端胞外區(qū)、跨膜區(qū)、c端胞質(zhì)區(qū)等三個結(jié)構(gòu)域的氨基酸殘基,其中只有一次跨膜結(jié)構(gòu),而作為離子通道蛋白

3、的輔助性β-亞基,與多種功能性α-亞基相互結(jié)合形成穩(wěn)定的具有不同的生理功能鉀離子通道異源多聚體,在心肌細胞動作電位的復極期發(fā)揮不同的細胞電生理效應。KCNE1、KCNE2廣泛分布于心肌細胞,對心肌細胞電壓門控性鉀離子通道電流進行調(diào)節(jié),參與心肌細胞動作電位的Ⅱ、Ⅲ相復極。因此,其表達的異常將影響相應離子通道的電生理特性。既往研究也表明KCNE基因表達異?？芍率宜佟⑹翌?、心臟長QT綜合征(long QT syndrome,LQTs)等惡性心

4、律失常發(fā)生;而KCNE基因表達異常與急性心肌梗死后心律失常是否相關尚有爭議。研究證實AMI早期應用β受體阻滯劑可減少心律失常的發(fā)生;而抗心律失常的電生理機制尚不完全清楚。目前國內(nèi)外β受體阻滯劑類藥物影響急性心肌梗死后KCNE1及KCNE2表達和分布的相關研究未見報道。
　　 目的：
　　 本研究重在通過建立大鼠急性心肌梗死模型,應用免疫印跡法(WesternBlotting)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(reverse tra

5、nscription polymerase chainreaction,RT-PCR)檢測急性心肌梗死后梗死周邊區(qū)心肌組織中KCNE1、KCNE2基因表達情況、觀察其表達動態(tài)變化的規(guī)律及比索洛爾對其表達的干預作用,為探討心肌梗死后心律失常發(fā)生和抗心律失常提供理論基礎。
　　 方法：
　　 選取健康8周齡雄性(Sprague-Dawley,SD)大鼠,體重200g～250g,稱重后用10%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉,在小動物

6、呼吸機及生物信號采集系統(tǒng)下行左冠狀動脈結(jié)扎術,制作大鼠急性心肌梗死模型。將成功建立的大鼠急性心肌梗死模型40只,隨機平均分為24小時組、1周組、4周組、比索洛爾組。同時24小時組、1周組及4周組設立假手術組作對照共30只,每組10只。比索洛爾組給予比索洛爾0.5mg/kg/d灌胃給藥4周,其余各組均以等量生理鹽水灌胃。于各組時間點末取左心室梗死周邊區(qū)心肌組織,而假手術組取對應左心室部位的心肌組織,用RT-PCR檢測心肌組織中的KCNE1

7、和KCNE2 mRNA的表達;Western blotting檢測心肌組織中的KCNE1和KCNE2蛋白的表達;免疫組化法定性檢測心肌組織中的KCNE1和KCNE2蛋白的分布情況。
　　 結(jié)果：
　　 1、假手術24小時組、1周組及4周組大鼠左心室相應部位心肌組織KCNE1、KCNE2 mRNA及蛋白均有表達,但各組間差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05),大鼠在急性心肌梗死后24小時梗死周邊區(qū)心肌組織中也有KCNE1、KC

8、NE2mRNA和相應的蛋白表達并逐步增加(P＜0.05),在1周時達到高峰。4周組和比索洛爾組二者mRNA和蛋白表達量下降但均高于假手術組(P＜0.05),而比索洛爾組二者mRNA和蛋白表達量明顯低于4周組(P＜0.05)。
　　 2、假手術組心肌細胞排列整齊,無明顯的炎癥細胞浸潤和膠原纖維組織增生;心肌梗死后梗死周邊區(qū)心肌組織細胞排列紊亂及代償性肥大,大量炎性細胞浸潤,間質(zhì)可見明顯膠原纖維增生,比索洛爾組炎性細胞浸潤,間質(zhì)膠原

9、增生、心肌細胞體積都較心肌梗死組減輕,心肌纖維排列較整齊。
　　 結(jié)論：
　　 正常大鼠左心室心肌組織有KCNE1、KCNE2的mRNA和蛋白質(zhì)表達;急性心肌梗死后梗死周邊區(qū)心肌組織中KCNE1、KCNE2表達水平上升,在每個時間點表達量不同且呈動態(tài)變化趨勢。在急性心肌梗死后梗死周邊區(qū)心肌組織因交感神經(jīng)亢進、腎素血管緊張素激活、缺血、缺氧、再灌注損傷、代謝紊亂等一系列病理因素共同作用的結(jié)果引起KCNE1、KCNE2在缺血