siRNA靶向抑制RAGE表達對大鼠急性心肌梗死后炎癥反應的影響.pdf

1、目的:觀察腺病毒介導siRNA靶向抑制心臟RAGE基因表達對大鼠急性心肌梗死后炎癥反應的影響。
　　方法:原代培養(yǎng)心肌細胞，給予不同滴度病毒液感染并確定最佳病毒感染復數。細胞實驗分組:(1)空白對照組（Con組）:正常培養(yǎng)，不予任何干預;(2)對照siRNA組（control siRNA組）:感染攜帶無序siRNA的腺病毒后低氧培養(yǎng)4h;(3)siRNA抑制組(RAGE siRNA組):感染攜帶RAGE靶向siRNA的重組腺病毒后

2、低氧培養(yǎng)4h。定量PCR檢測RAGE基因表達量，Western Blot檢測RAGE蛋白及ERK1/2、pERK1/2蛋白表達水平。動物實驗分組:(1)假手術組(Sham)12只，開胸暴露心臟，不予結扎冠脈;(2)心肌梗死手術組(AMI)12只，結扎冠狀動脈前降支，術后無其他干預;(3)對照siRNA組（control siRNA）12只，結扎前降支后30min于梗死周邊區(qū)域注射攜帶無序siRNA的重組腺病毒;(4)siRNA干預組(R

3、AGE siRNA組)12只，結扎前降支后30min于梗死周邊區(qū)域注射靶向RAGE基因的siRNA腺病毒。所有實驗大鼠分別于術后1周和3周行心臟彩超檢查心功能，術后3周處死取材，取心臟不同部位心肌組織，定量PCR技術檢測RAGE基因mRNA表達水平;應用Western blot方法和免疫組化分析檢測RAGE蛋白和ERK1/2、pERK1/2蛋白表達水平。
　　結果:在細胞實驗中，siRNA抑制組RAGE的mRNA水平較對照siRN

4、A組顯著降低(p=0.009)，較Con組略高，但差異無統(tǒng)計學意義(p=0.051);siRNA抑制組RAGE蛋白表達水平較對照siRNA組顯著降低(p=0.029)，與Con組比較無統(tǒng)計學意義(p=0.064);siRNA抑制組ERK1/2蛋白的pERK1/2/ERK1/2比值較對照siRNA組降低(p=0.011)，與Con組比較無統(tǒng)計學意義(p=0.067)，siRNA抑制組pERK1/2蛋白較對照siRNA組降低。對照siRNA

5、組RAGE的mRNA水平、蛋白表達水平和pERK1/2蛋白表達水平均較Con組明顯升高(p＜0.001)。在動物實驗中，心肌梗死手術組(AMI)梗死區(qū)心肌組織RAGE的mRNA水平較非梗死區(qū)明顯升高(p＜0.001);Western Blot分析顯示梗死區(qū)RAGE蛋白和pERK1/2蛋白表達水平明顯較非梗死區(qū)高(p＜0.001);假手術組(Sham)心肌組織RAGE的mRNA水平和RAGE蛋白表達水平及pERK1/2蛋白表達水平與AMI

6、組非梗死區(qū)心肌組織比較無顯著性差異(分別為p=0.343，p=0.298和p=0.336)。予siRNA干預后，術后1周后超聲結果顯示對照siRNA組與siRNA干擾組相比，EF無明顯差別(p=0.409);術后3周超聲結果顯示，與對照siRNA組相比，siRNA干擾組EF較術后1周好轉，EF顯著高于對照siRNA組(p=0.011);qPCR檢測和Western blot檢測結果顯示，同對照siRNA組相比，siRNA干擾組RAGE的

7、mRNA水平和蛋白表達水平顯著下降（分別為p＜0.001和p=0.034）;免疫組化結果顯示siRNA干擾組心肌組織RAGE蛋白及pERK1/2蛋白表達較對照siRNA組顯著下降;而siRNA干擾組RAGE的mRNA及RAGE、pERK1/2蛋白表達水平與Sham組相比均無顯著性差異(p＞0.05)。
　　結論:靶向RAGE的siRNA能顯著抑制低氧培養(yǎng)的心肌細胞RAGE基因的表達。于大鼠心肌梗死周邊區(qū)域注射靶向RAGE基因的si