西方蜜蜂(Apis mellifera)王漿蛋白mrjp6和mrjp8的表達(dá)與功能研究.pdf

1、蜂王漿及主要蛋白組分王漿蛋白家族在蜜蜂生物學(xué)以及養(yǎng)蜂生產(chǎn)中具有十分重要的意義和作用，王漿蛋白家族共有10個(gè)成員，其中的MRJP1~5在蜂王漿中的含量很高，而 MRJP6~9的含量則極少甚至檢測(cè)不到。為探究王漿蛋白家族中含量極少的成員MRJP6和MRJP8的基因表達(dá)與相關(guān)生物學(xué)功能，本課題對(duì)MRJP6基因在不同發(fā)育時(shí)期的三型蜂及其各組織部位的表達(dá)特性進(jìn)行了研究，同時(shí)，利用RNA干擾技術(shù)系統(tǒng)的探討了利用dsRNA干擾MRJP8基因的表達(dá)。具

2、體結(jié)果如下：
　　首先，為了弄清 MRJP6基因在意大利蜜蜂體內(nèi)的時(shí)空表達(dá)情況，為進(jìn)一步的功能研究提供依據(jù)。本研究利用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)對(duì)西方蜜蜂不同級(jí)型、發(fā)育時(shí)期和組織內(nèi)的mrjp6表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)和分析。結(jié)果表明，mrjp6在蜜蜂幼蟲(chóng)和蛹期的表達(dá)水平較低，與對(duì)照基本一致，但在成年蜜蜂體內(nèi)表達(dá)量顯著提高，約為對(duì)照的25~28倍(p<0.05)；在成年三型蜂體內(nèi)，其在雄蜂體內(nèi)表達(dá)量低，約為對(duì)照的25倍，而在雌性的工蜂和蜂王體內(nèi)

3、表達(dá)量明顯較高，可達(dá)28倍(p<0.05)。這說(shuō)明mrjp6的表達(dá)與蜜蜂的性別有關(guān)。但其在工蜂和蜂王之間的表達(dá)沒(méi)有差異，顯示其表達(dá)與蜜蜂級(jí)型無(wú)關(guān)；進(jìn)一步的研究表明，成年工蜂體內(nèi)，mrjp6在哺育蜂和采集蜂體內(nèi)表達(dá)量很高且比較穩(wěn)定，通過(guò)對(duì)不同組織的檢測(cè)表明該基因主要是在成年蜜蜂的頭部特異性高表達(dá)。作為王漿蛋白家族的一員，mrjp6在成年雌性蜜蜂頭部高水平表達(dá)，但又與典型的一般王漿蛋白在9日齡前后哺育蜂體內(nèi)高表達(dá)、其他階段低表達(dá)的模式不同，

4、說(shuō)明其具有不同于一般王漿蛋白的功能，分析其可能與蜜蜂神經(jīng)系統(tǒng)的功能以及成年雌性蜜蜂復(fù)雜的行為發(fā)育模式有關(guān)。
　　其次，為了探究 MRJP8在意大利蜜蜂體內(nèi)的生物學(xué)功能，揭示其表達(dá)機(jī)制，本課題設(shè)計(jì)了試劑盒合成dsRNA和工程菌合成dsRNA兩種dsRNA合成途徑，并通過(guò)飼喂和注射兩種方法對(duì) mrjp8進(jìn)行干擾試驗(yàn)。結(jié)果表明，在用試劑盒合成 dsRNA的干擾試驗(yàn)中，1μg飼喂干擾條件下工蜂和蜂王的死亡率都很高，達(dá)到75％；當(dāng)濃度降至5

5、0 ng時(shí)，飼喂干擾對(duì)死亡率幾乎沒(méi)有影響。兩種不同濃度飼喂干擾試驗(yàn)對(duì)沉默工蜂和蜂王體內(nèi)mrjp8的表達(dá)無(wú)效果。另一方面，利用1μg試劑盒合成dsRNA注射干擾剛出房工蜂的試驗(yàn)中，無(wú)論是蛋白層面還是基因?qū)用娑急憩F(xiàn)出試驗(yàn)組和對(duì)照組無(wú)差別。在用mrjp8-L4440-HT115工程菌誘導(dǎo)合成dsRNA的飼喂干擾試驗(yàn)中，飼喂的菌濃度越高工蜂的死亡率也越高。在4×109濃度工程菌飼喂干擾下，mrjp8在工蜂體內(nèi)的表達(dá)量呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，但差異不顯著。

6、
　　本課題利用熒光定量技術(shù)全面定量分析了西方蜜蜂mrjp6的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)mrjp6在三型蜂體內(nèi)不存在級(jí)型差異，在雌性成年蜜蜂體內(nèi)表達(dá)高于雄性蜜蜂，在工蜂體內(nèi)存在頭部特異性高表達(dá)，揭露其可能與蜜蜂神經(jīng)系統(tǒng)功能和雌性成年蜜蜂發(fā)育有關(guān)。在利用dsRNA干擾西方蜜蜂mrjp8的試驗(yàn)中，飼喂dsRNA的方法使得成年工蜂死亡率升高，通過(guò)不同濃度對(duì)工蜂和蜂王進(jìn)行飼喂干擾和注射干擾都沒(méi)能使mrjp8表達(dá)量顯著降低，試驗(yàn)結(jié)果顯示mrjp8或許在