王漿主蛋白的抗衰老功能及分子機理研究.pdf

1、隨著國內(nèi)外人口老齡化問題的加劇，國際市場對抗衰老功能食品的需求越來越大，蜂王漿(RJ)作為國際公認的傳統(tǒng)抗衰老功能食品，將發(fā)揮更加重要的作用。根據(jù)新近研究報道，王漿主蛋白(MRJPs)是RJ的關鍵活性成分，但是否對哺乳動物具有抗衰老作用及作用機理尚未見報道。本研究以從新鮮RJ超濾分離的MRJPs凍干粉為研究對象，以自然衰老大鼠和人體細胞為模型，進行了MRJPs的抗衰老作用及分子機理系統(tǒng)研究，結果如下:
　　1.MRJPs對大鼠的抗

2、衰老作用及分子機理
　　電泳結果顯示MRJPs集中在49-80 kDa，其氨基酸組成與酪蛋白相似，說明MRJPs的功能不是體現(xiàn)在氨基酸水平上，而是通過特殊的形式來表現(xiàn)其生物活性。衰老大鼠的附睪和睪丸指數(shù)顯著低于青年大鼠，口服MRJPs并不能改變這種臟器的退化，對其它臟器指數(shù)和體重也未產(chǎn)生明顯影響。蘇木精-伊紅染色結果表明，MRJPs可以明顯改善衰老引起的大鼠肝臟及腎臟等重要器官出現(xiàn)的病理性特征。口服MRJPs能顯著提高大鼠血液的C

3、AT活力(P＜0.05)，降低血液的脂質過氧化物MDA水平;MRJPs干預組的GSH含量與GSH-PX活力與青年大鼠表現(xiàn)出類似的調節(jié)方式，顯示MRJPs具有良好的抗氧化活性。
　　mTOR轉錄水平與MRJPs干預劑量呈正相關。S6激酶(S6K)通過mTOR途徑被激活，并出現(xiàn)轉錄水平上調趨勢。青年大鼠的mTOR基因轉錄水平顯著高于自然衰老對照組，而MRJPs干預能提高衰老大鼠的mTOR基因轉錄水平，類似現(xiàn)象在s6k基因中也有發(fā)現(xiàn)。青

4、年大鼠的Foxo1基因轉錄水平顯著高于自然衰老對照組，而MRJPs干預能提高衰老大鼠Foxo1基因轉錄水平，顯示抗衰老活性。此外，MRJPs能顯著提高大鼠血液中端粒酶逆轉錄酶TERT基因的表達，說明其抗衰老機理可能與TERT的轉錄水平的調節(jié)有關。與SOD未出現(xiàn)明顯改變一樣，Sod1基因的轉錄水平在干預后也未出現(xiàn)明顯變化。
　　2.MRJPs對大鼠認知功能的改善作用
　　動物水迷宮實驗表明，逃避潛伏期較對照和酪蛋白組分別縮短了

5、48.5％(P=0.0045)和49.9％(P=0.0036);穿過目標區(qū)域的次數(shù)較對照和酪蛋白組分別提高了177.4％和46.1％，說明MRJPs能顯著改善老年大鼠的空間認知能力。基于超高效液相色譜四極桿飛行時間質譜(UPLC-QTOF/MS)的大鼠尿液指紋圖譜表明，MRJPs干預衰老大鼠后，其代謝特征出現(xiàn)回歸青年大鼠的趨勢。鑒定了28個與衰老相關的生物標記物，其中6個標記物，煙酸單核苷酸(1)，丙氨酸丁氨酸硒醚(2)，CDP-乙醇胺

6、(3)，磺基丙氨酸(4)，磷酸烯醇式丙酮酸(5)和黃嘌呤核苷(6)在MRJPs干預后發(fā)生顯著改變。結合文獻RJ改善記憶的功能分析，RJ來源的MRJPs有可能是一種新的提高認知功能的補充蛋白質。
　　3.MRJPs及KHCO3對大鼠骨密度的改善作用
　　補充MRJPs及KHCO3不會影響大鼠體重。血液肝功能檢測結果表明，MRJPs及KHCO3作為膳食補充劑是安全的，且對肝功能有一定調節(jié)作用。MRJPs會導致大鼠骨密度輕微降低，

7、推測其通過降低雌激素水平、促進鈣流失而引起骨密度的降低。同時補充KHCO3(100mg/mL)可防止骨密度的降低，并引起雌二醇水平降低，而MRJPs與雌二醇共同作用于成骨細胞時存在拮抗作用，說明MRJPs與KHCO3對骨密度的聯(lián)合保護作用可能是通過降低MRJPs和雌二醇對成骨細胞的拮抗作用實現(xiàn)的。MRJPs與KHCO3的協(xié)同作用具有一定的抗氧化性。補充MRJPs和KHCO3在一定程度上能降低CTX-Ⅰ，顯著提高Ⅰ型原骨膠原(P1NP)和

8、OPG含量，而補充的KHCO3有類似的效果。MRJPs和雌二醇能上調clock、cry1和cry2，下調bmal1，說明通過時鐘節(jié)律調控途徑可影響骨密度。
　　4.MRJPs對MRC-5細胞的抗衰老作用
　　當MRC-5細胞處于中年期時，補充終濃度25-200μg/mL的MRJPs對MRC-5雖有一定的促進作用，但不顯著。流式細胞檢測結果表明，MRJPs對處于中年期MRC-5細胞增殖指數(shù)的影響并不明顯。但當MRC-5細胞進入