西方蜜蜂(Apis mellifera)儲(chǔ)存蛋白hex70b和hex110的表達(dá)與功能研究.pdf

1、儲(chǔ)存蛋白是由幼蟲(chóng)脂肪體細(xì)胞合成并分泌釋放到血淋巴內(nèi)，在變態(tài)發(fā)育時(shí)再被脂肪體細(xì)胞以受體介導(dǎo)的方式吸收，用于重新構(gòu)建蛹的組織與結(jié)構(gòu)。蜜蜂是全變態(tài)昆蟲(chóng)，其個(gè)體發(fā)育歷經(jīng)卵、幼蟲(chóng)、蛹和成蟲(chóng)四個(gè)階段。其中幼蟲(chóng)到蛹的變態(tài)發(fā)育階段需要降解幼蟲(chóng)組織，重新構(gòu)建蛹的組織與結(jié)構(gòu)，這一過(guò)程涉及儲(chǔ)存蛋白的作用。昆蟲(chóng)儲(chǔ)存蛋白的核心功能是為昆蟲(chóng)從幼蟲(chóng)到蛹的變態(tài)發(fā)育提供物質(zhì)基礎(chǔ)和保障。此外，儲(chǔ)存蛋白在不同的昆蟲(chóng)體內(nèi)有不同的表達(dá)調(diào)控機(jī)制，擔(dān)負(fù)著從變態(tài)、級(jí)型、性別決定、產(chǎn)卵

2、、壽命到免疫等多樣的生物學(xué)功能。
　　為系統(tǒng)的探究?jī)?chǔ)存蛋白在蜜蜂體內(nèi)的表達(dá)模式及其可能的生物學(xué)功能，本試驗(yàn)利用SDS-PAGE電泳技術(shù)在蛋白水平上對(duì)處于變態(tài)期前后的蜜蜂三型蜂的儲(chǔ)存蛋白進(jìn)行檢測(cè)和分析，評(píng)價(jià)hexamerin在三型蜂變態(tài)發(fā)育中的作用。結(jié)果表明幼蟲(chóng)期血淋巴內(nèi)蛋白含量較少，可檢測(cè)到的蛋白種類(lèi)也較少。而到了預(yù)蛹期，血淋巴內(nèi)的蛋白含量迅速增高，蛋白的種類(lèi)也迅速增加。且最為明顯的一個(gè)變化是該時(shí)期血淋巴新出現(xiàn)了4種含量極高的蛋白

3、，經(jīng)蛋白測(cè)序分析它們?yōu)槊鄯鋒examerin儲(chǔ)存蛋白，它們合計(jì)占據(jù)血淋巴總蛋白的80％以上，隨著變態(tài)發(fā)育過(guò)程的進(jìn)行，這四種蛋白的含量也逐漸減少，至羽化時(shí)血淋巴內(nèi)基本檢測(cè)不到了。四種hexamerin蛋白在血淋巴的含量雖然在三型蜂發(fā)育期整體趨勢(shì)大體一致，但是在相同的發(fā)育時(shí)期，同一種hexamerin在工蜂、蜂王、雄蜂血淋巴內(nèi)的含量也有差別，在蜂王和雄蜂血淋巴內(nèi)含量比工蜂血淋巴內(nèi)含量要高，在三型蜂體內(nèi)表現(xiàn)出不完全一致表達(dá)的特性。
　　

4、RNAi普遍應(yīng)用于各種基因生物功能的研究中。大量合成純凈的dsRNA是RNAi相關(guān)試驗(yàn)和實(shí)踐應(yīng)用的前提。本試驗(yàn)采用試劑盒體外轉(zhuǎn)錄和用大腸桿菌誘導(dǎo)兩種方法合成hex110 dsRNA和hex70b dsRNA，均成功的獲得目標(biāo)的dsRNA。尤其是大腸桿菌誘導(dǎo)合成dsRNA的技術(shù)體系的建立，為后續(xù)功能研究及其他蜜蜂相關(guān)基因的應(yīng)用打下了基礎(chǔ)。在此基礎(chǔ)上。我們將合成的dsRNA分別對(duì)蜜蜂工蜂，雄蜂和蜂王進(jìn)行飼喂和顯微注射兩種方法的干擾試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)

5、結(jié)果表明，dsRNA并沒(méi)有使hex110和hex70b基因沉默，hex110和hex70b仍有表達(dá)。干涉研究其功能的工作還需進(jìn)一步的探究。
　　本試驗(yàn)利用 SDS-PAGE電泳技術(shù)通過(guò)對(duì)處于變態(tài)期前后的蜜蜂三型蜂在蛋白水平上儲(chǔ)存蛋白進(jìn)行檢測(cè)和分析，從蛋白層面評(píng)價(jià)hexamerin在三型蜂變態(tài)發(fā)育中的作用。進(jìn)而利用試劑盒體外轉(zhuǎn)錄和大腸桿菌誘導(dǎo)兩種方法合成的hex110 dsRNA和 hex70b dsRNA，成功的建立了利用大腸桿菌