感染豬鏈球菌2型后細(xì)胞因子的變化以及分泌核酸酶A的生物學(xué)研究.pdf

1、分類號密級華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文感染豬鏈球菌2型后細(xì)胞因子的變化以及分泌核酸酶A的生物學(xué)研究ChangesofcytokinesexPressionProgileinPigsinfeetedbyStrePtoeoccussuistyPe2andbiologieProertystudyofSeeretedNuCIeaseA研究生:康超指導(dǎo)教師:金梅林教授指導(dǎo)小組:陳煥春教授金梅林教授郭愛珍教授周銳教授貝為成副教授專業(yè):預(yù)防獸醫(yī)學(xué)獲得學(xué)位

2、名稱:農(nóng)學(xué)碩士研究方向:動物傳染病獲得學(xué)位時間:2008年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院二00八年六月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2008屆碩士學(xué)位論文2.2.6引物設(shè)計，合成和融解曲線的檢測.....................................................................……232.2.7。DNAPCR擴(kuò)增鑒定和RNA樣品中DNA檢鋇l................................

3、................……242.2.8熒光定量反應(yīng)........................................................................................................……242.2.9數(shù)據(jù)處理........................................................................

4、........................................……243結(jié)果......................................................................................................................................……253.1豬的臨床癥狀..........................

5、..............................................................................……253.2cDNAPCR擴(kuò)增鑒定和RNA樣品中DNA檢測................................................……253.3熒光定量PCR的融解曲線.............................................

6、............................……，.....……263.4熒光定量PCR擴(kuò)增細(xì)胞因子結(jié)果.........................................................................……274討論..................................................................................

7、...................................................……294.1DNA的定量的研究.............……，..............................................................................……294.2各個細(xì)胞因子mRNA的表達(dá).......................................

8、...........................................……305小結(jié).....................................................................................................................................……31第三章分泌核酸酶(SsnA)的生物學(xué)特性研究...........

9、............................................................……咒1前言...................................................................................................................................……322材料和方法.............

10、............................................................................................................……322.1材料....................................................................................……，................

11、...............……322.1.1菌株及質(zhì)粒...........................................................……，..........................................……犯2.1.2酶及主要試劑.........……，.............................................................

12、...........................……322.1.3一抗和二抗............................................................................................................……332.1.4免疫動物..........................................................

13、.....................................................……342.1.5主要試劑及溶液的配制.......................................................................................……342.1.6細(xì)菌培養(yǎng)基...............................................

14、............................................................……342.1.7質(zhì)粒抽提相關(guān)溶液................................................................................................……342.1.8SDS一PAGE相關(guān)溶液..........................

15、...................................................................……352.1.9Westem一blot及蛋白質(zhì)斑點雜交緩沖液...............................................................……352.1.IOELISA相關(guān)溶液........................................

16、..........................................................……362.1.11其他......................................................................................................................……362.2方法.......................

17、...................................................................................................……372.2.1弓1物設(shè)計...........................................................................................................

18、....……372.2.2基因組DNA的提取..............................................................................................……372.2.3分泌核酸酶(ssnA)基因的克隆........................................................................……372.2

19、.4PCR產(chǎn)物的回收與純化...................……，..............................................................……382.2.5PcR產(chǎn)物與pET28a載體的連接........................................................................……382.2.6感受態(tài)細(xì)胞的制備(氯化鈣法)..

20、.......................................................................……382.2.7連接產(chǎn)物及質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化........................................................................................……392.2.8質(zhì)粒的小量制備(堿裂解法)....................

21、.........................................................……392.2.9重組表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化和鑒定.................................................................................……392.2.10大腸桿菌BLZI(DE3)的誘導(dǎo)表達(dá).................................

22、................................……392.2.11確定最佳的誘導(dǎo)表達(dá)條件..........................................................................……、..……402.2.12小量誘導(dǎo)..........................................................................

23、...........……:..................……402.2.13大量誘導(dǎo)..............................................................................................................……402.2.14多克隆抗體的制備..............................................